鹽酸法舒地爾對(duì)內(nèi)毒素致大鼠急性腎損傷的防治作用研究.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)腹腔注射內(nèi)毒素（lipopolysaccharide，LPS）建立大鼠急性腎損傷（Acute kidney injury，AKI）模型，探討鹽酸法舒地爾（Fasudil hydrochloride，F(xiàn)asudil）對(duì)AKI大鼠血清腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）、內(nèi)皮素-1（Endothelin-1，ET-1）、腎組織Rho激酶-I（Rho kinases-

2、I，ROCK-I）及核轉(zhuǎn)錄因子-Kappa B p65（Nuclear Transcription Factor ofKappa B p65，NF-κB p65）變化的影響，研究Fasudil在AKI中的腎臟保護(hù)作用。
　　 方法：
　　 健康雄性清潔級(jí)Wister大鼠65只隨機(jī)分為空白對(duì)照組、AKI模型組和治療組。
　　 對(duì)照組：共5只。1ml生理鹽水腹腔注射。
　　 模型組：共30只。再隨機(jī)分為6個(gè)時(shí)

3、間點(diǎn)（1h，6h，12h，24h，48h，72h），每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各5只大鼠。LPS，6mg/kg體質(zhì)量，生理鹽水稀釋至1ml，腹腔注射，建立AKI模型。
　　 治療組：共30只。再隨機(jī)分為6個(gè)時(shí)間點(diǎn)（1h，6h，12h，24h，48h，72h），每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各5只大鼠。各組在注射LPS1小時(shí)前給予Fasudil30mg/kg體質(zhì)量，同樣生理鹽水稀釋至1ml，腹腔注射。其中48h及72h組每24h追加Fasudil30mg/kg。

4、r>　　 各組根據(jù)不同的時(shí)間點(diǎn)觀察1h-72h不等，并在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)采血5ml后處死大鼠。測(cè)定血漿內(nèi)毒素水平，血清肌酐（Cretonnes，CRE）、尿素氮（bloodurea nitrogen，BUN），應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附方法（enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA）檢測(cè)各組血清TNF-α、ET-1的濃度含量。免疫組化方法檢測(cè)腎組織ROCK-I、NF-κB p65的表達(dá)。光學(xué)顯微鏡同步觀察各組大鼠腎

5、臟病理改變。
　　 結(jié)果：
　　 1.血清CRE及BUN變化的比較：模型組CRE、BUN于6h明顯升高，與對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；并于24h達(dá)到高峰，48h則顯著下降。治療組各時(shí)間點(diǎn)CRE、BUN變化不如模型組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)升高明顯。模型12h，24h組CRE、BUN與治療12h，24h組相比，有顯著性差異（P<0.01）。
　　 2.血清TNF-α變化比較：模型組血清TNF-α濃度于1h立即顯著升

6、高，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.01），然后迅速下降，6h及其以后時(shí)間點(diǎn)則一直處于比較低的水平，呈陡直的單峰曲線：而治療組各時(shí)間點(diǎn)中TNF-α濃度變化不如模型組明顯，模型1h組TNF-α濃度與治療1h組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　 3.血清ET-1變化比較：模型組血清ET-1濃度于1h顯著升高，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.01），并于12h達(dá)高峰，然后開(kāi)始下降，72h基本降至正常。模型6h，12h，24h

7、組ET-1的變化與治療組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　 4.血漿LPS變化比較：模型組及治療組中血漿LPS水平于1h迅速增加，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.01），并于6h達(dá)高峰，12h則迅速下降，模型組與治療組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 5.腎組織ROCK-I表達(dá)變化的比較：對(duì)照組ROCK-I在腎小管上皮細(xì)胞中顯示微量表達(dá)：模型1h組Rock-I陽(yáng)性表達(dá)面積顯著升高，與對(duì)照組相比，差異

8、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；并于12h達(dá)高峰，24h開(kāi)始下降。模型6h，12h，24h，48h組Rock-I陽(yáng)性表達(dá)面積與治療組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　 6.腎組織NF-κB p65表達(dá)變化的比較：對(duì)照組顯示NF-κB p65在腎小球及腎小管中有微量表達(dá)。模型組NF-κB p65陽(yáng)性表達(dá)面積于1h立即增加，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.01），并于12h達(dá)高峰，24h組則顯著下降。模型1h，6h，

9、12h，24h組陽(yáng)性表達(dá)面積與治療組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　 7.病理切片對(duì)照：模型組早期腎小球大致正常，腎小管上皮細(xì)胞腫脹、脂肪變性和空泡變性，晚期出現(xiàn)不同程度腎小管上皮細(xì)胞壞死，細(xì)胞核固縮、溶解、消失。壞死的腎小管上皮脫落入管腔內(nèi)，呈模糊的顆粒狀結(jié)構(gòu)。小管周?chē)拈g質(zhì)充血、水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。治療組出現(xiàn)部分腎小管上皮細(xì)胞腫脹、少量變性與壞死，腎間質(zhì)無(wú)明顯改變及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。
　　 8.腎小管壞死

10、評(píng)分：模型組于1h即出現(xiàn)嚴(yán)重的腎臟病理?yè)p傷，并于24h達(dá)高峰。模型1h組腎小管壞死評(píng)分明顯升高，與對(duì)照組相比有顯著性差異（P<0.01）。模型組各時(shí)間點(diǎn)的腎小管壞死評(píng)分與治療組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 Fasudl可能是通過(guò)阻斷Rho/Rho激酶通路及NF-κB p65途徑，降低ET-1和炎性細(xì)胞因子TNF-α的表達(dá)水平，改善腎功能，減輕LPS導(dǎo)致的腎損傷，對(duì)LPS導(dǎo)致的大鼠AKI時(shí)腎臟具