內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在柯薩奇病毒B3誘導(dǎo)的急性病毒性心肌炎中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景:
　　急性病毒性心肌炎(Acute viral myocarditis，AVMC)為病毒感染引起的心肌局灶性或彌散性免疫性炎癥病變。臨床上以腸道病毒柯薩奇病毒B3(coxsackievirusB3，CVB3)感染引起的心肌炎最為多見(jiàn)。臨床觀察發(fā)現(xiàn)柯薩奇病毒B3的病毒量、復(fù)制速率和存在時(shí)間與心肌損傷和疾病進(jìn)展直接相關(guān)，但具體機(jī)制尚未闡明。研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress， ER st

2、ress)及其下游促凋亡分子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein，CHOP)在許多病毒感染性疾病中發(fā)揮重要作用，其與病毒感染引起的宿主細(xì)胞凋亡有關(guān)，但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否參與了急性病毒性心肌炎的發(fā)生和發(fā)展及其相關(guān)作用機(jī)制尚未明確。
　　方法:
　　本研究應(yīng)用柯薩奇病毒B3腹腔接種法建立急性病毒性心肌炎小鼠模型，并使用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激保護(hù)劑熊去氧膽酸(tauroursodeoxycholic acid，TU

3、DCA)灌胃來(lái)研究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在急性病毒性心肌炎中的作用，通過(guò)心臟超聲和血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)評(píng)價(jià)心功能改變，接種病毒7天后收集小鼠心臟組織和血標(biāo)本。應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色（Immunological Histological Chemistry，IHC），western blot蛋白印記法，酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA），TUNEL染色等方法檢測(cè)心臟炎癥反應(yīng)、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平、心肌損

4、傷和心肌細(xì)胞凋亡（apoptosis）等情況。
　　結(jié)果:
　　生存分析提示急性病毒性心肌炎組小鼠存活率顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。心臟超聲和血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果提示，急性病毒性心肌炎組左室射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率、dP/dt最大值、dP/dt最小值和左室收縮末壓等心功能參數(shù)均顯著低于對(duì)照組（P值均＜0.01），而左室舒張末壓顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。Western blot檢測(cè)進(jìn)一步提示急性病毒性心肌炎組小鼠心功能顯著

5、降低，其心衰標(biāo)志物心房鈉尿肽的蛋白表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。ELISA檢測(cè)提示急性病毒性心肌炎組存在心肌損傷，其血清心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cardiac troponinⅠ，cTnⅠ)水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。組織學(xué)染色顯示急性病毒性心肌炎組小鼠心肌組織可見(jiàn)明顯的心肌細(xì)胞變性壞死和間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而對(duì)照組未見(jiàn)異常改變;急性病毒性心肌炎組心臟組織病理學(xué)評(píng)分和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度（表面標(biāo)記F4/80）均顯著高于對(duì)照組（P值均

6、＜0.01）。急性病毒性心肌炎組心臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平顯著提高，免疫組化染色結(jié)果提示急性病毒性心肌炎組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物KDEL的蛋白表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)，western blot檢測(cè)進(jìn)一步提示急性病毒性心肌炎組內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激感受蛋白p-PERK、p-IRE1α和ATF6的蛋白表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組(P值均＜0.01)。TUNEL染色提示急性病毒性心肌炎組心肌細(xì)胞凋亡比例顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。Western blot

7、檢測(cè)提示急性病毒性心肌炎組心臟CHOP的蛋白表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），并且CHOP蛋白的上調(diào)與抗凋亡蛋白Bcl-2的降低以及促凋亡蛋白Bax和caspase3的上調(diào)存在相關(guān)性。而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激保護(hù)劑TUDCA的應(yīng)用顯著降低CVB3感染后心肌組織的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平和炎癥反應(yīng)水平、減輕心肌損傷、改善心臟功能并增加存活率;同時(shí)，TUDCA的應(yīng)用顯著降低心臟CHOP、caspase3和Bax蛋白表達(dá)、提高Bcl-2蛋白表達(dá)并減少心肌細(xì)胞