γδT17細(xì)胞在柯薩奇病毒性心肌炎發(fā)病中的作用及其機(jī)制.pdf

1、病毒性心肌炎（VIRAL MYOCARDITIS，VMC）是一類由病毒感染引起的以心肌局灶性或彌漫性炎癥為主要特征的臨床常見心血管系統(tǒng)疾病。VMC臨床表現(xiàn)不明顯且缺乏針對(duì)性診療手段，因此其真實(shí)發(fā)病率被低估。VMC的全球發(fā)病率估計(jì)在0.12-12％之間，且發(fā)病呈上升趨勢；我國VMC的發(fā)病率為5%-15%不等。VMC已成為青少年猝死的主要原因之一，占心血管類疾病引發(fā)的青少年猝死病例的4%-20%。VMC的長久不愈容易進(jìn)展為心臟纖維化、致死性

2、擴(kuò)張性心肌?。―ILATED CARDIOMYOPATHY，DCM）和心衰。作為影響人類健康的一類重要的心血管類疾病，VMC的發(fā)病機(jī)制尚未明確，臨床缺少有效的診療方法。因此，闡明VMC的發(fā)病機(jī)制具有重要的理論和實(shí)踐意義。引發(fā)VMC的病毒包括腸道病毒、腺病毒、流感病毒、巨細(xì)胞病毒等，其中腸道病毒 B3型柯薩奇病毒（COXSACKIEVIRUS B TYPE3，CVB3）感染引起的VMC占30%左右。
　　CVB3為小核糖病毒科無衣殼

3、正鏈RNA病毒。經(jīng)糞口途徑感染，入血后通過血液循環(huán)進(jìn)入心臟、胰腺、腦、肝臟、肺、脾臟等，通過柯薩奇-腺病毒受體（Coxsackie-adenovirus receptor，CAR）和輔助受體衰變加速因子（Decay accelerating factor，DAF）感染心肌細(xì)胞、胰腺細(xì)胞等，導(dǎo)致心肌炎、胰腺炎、肝炎、病毒性腦炎等癥狀，其中病毒性心肌炎較為顯著。CVB3引起的病毒性心肌炎可分為三個(gè)階段：（1）急性病毒期；（2）亞急性免疫期；

4、（3）慢性心肌病期。在急性期（0-3天），CVB3在心肌細(xì)胞大量復(fù)制，造成心肌直接損傷；在亞急性期（4-10天），病毒感染激活心臟局部固有免疫，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子和趨化因子的分泌以及多種免疫細(xì)胞的浸潤，這一免疫浸潤在第7-12天達(dá)到高峰，即所謂急性心肌炎（acute VMC）；在感染后期，炎癥減輕，啟動(dòng)組織修復(fù)，但炎癥遷延不愈則可能進(jìn)展至慢性心肌炎和纖維化。由此可見急性VMC有少量病毒直接損傷因素，但主要由心臟局部的免疫細(xì)胞浸潤帶來的免疫

5、炎癥損傷所介導(dǎo)。急性VMC期間心臟浸潤細(xì)胞主要包括：巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、T細(xì)胞，以及少量B、肥大細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DC）和 NK等。其中巨噬細(xì)胞最多，而研究最多的是急性VMC期間Th1和Th17細(xì)胞的炎癥功能。上述免疫細(xì)胞分泌的炎性細(xì)胞因子如TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-17是致VMC最為相關(guān)的細(xì)胞因子。
　　以往對(duì)VMC的研究重點(diǎn)大多集中于適應(yīng)性免疫應(yīng)答，特別是Th1、Th17、Tr

6、eg等在VMC發(fā)病中的作用及機(jī)制，而針對(duì)感染早期的固有免疫研究較少。固有免疫是機(jī)體抗感染的第一道防線，發(fā)揮早期非特異抗病原體作用，更重要的是，固有免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞和 DC表面或胞內(nèi)的多種模式識(shí)別受體（PRRs）通過識(shí)別病原體特定的病原相關(guān)分子模式（PAMPs），激活固有免疫信號(hào)通路，啟動(dòng)促炎因子和I型干擾素（IFNα/β）分泌和抗原提呈相關(guān)分子（MHC II和B7）高表達(dá)，因此固有免疫對(duì)于啟動(dòng)和調(diào)控后續(xù)T、B適應(yīng)性免疫應(yīng)答格局起關(guān)鍵作

7、用。國內(nèi)外學(xué)者陸續(xù)報(bào)道了感染早期心臟浸潤的巨噬細(xì)胞、NK、γδT細(xì)胞功能以及TLR1-TLR9、RIG-1等PRRs介導(dǎo)的固有免疫炎癥作用對(duì)于VMC發(fā)生的影響。而我們課題組前期致力于巨噬細(xì)胞、TLRs固有免疫信號(hào)激活及其效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)CVB3感染早期心臟局部巨噬細(xì)胞 M1/M2差異性極化、經(jīng)由 TLR13等固有免疫信號(hào)通路所介導(dǎo)的抗病毒作用及促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子作用，在急性 CVB3發(fā)病中扮演非常重要的初始作用。提示固有免疫是闡明VMC發(fā)生發(fā)展

8、機(jī)制的重要前沿。
　　在對(duì) VMC的致炎細(xì)胞因子研究中，IL-17A無疑是最重要和研究最多的明星分子之一。IL-17細(xì)胞因子包括IL-17A至IL-17F及其受體等一系列家族分子，是一種在感染和腫瘤等發(fā)生早期在局部分泌的炎癥細(xì)胞因子，發(fā)揮局部促炎作用和組織修復(fù)等多種功能。2000年前后的若干報(bào)道，陸續(xù)證實(shí)促炎細(xì)胞因子IL-17A在VMC發(fā)病中發(fā)揮必不可少的作用，IL-17A KO小鼠發(fā)生VMC的幾率和嚴(yán)重程度顯著下降，基于IL-1

9、7A是CD4+Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)分子，推斷Th17在VMC發(fā)病中扮演重要作用。然而隨著免疫學(xué)界對(duì)于固有免疫的認(rèn)識(shí)的不斷深入，以及對(duì)于固有免疫細(xì)胞及功能亞群的不斷發(fā)現(xiàn)，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)分泌IL-17A的免疫細(xì)胞除Th17，還有多種固有免疫細(xì)胞和上皮細(xì)胞，其中γδT細(xì)胞逐漸被認(rèn)為是IL-17A的一個(gè)重要來源。γδT細(xì)胞是取用多樣性顯著有限的TCRγ和TCRδ鏈的不同于傳統(tǒng)取用α/β鏈的αβT細(xì)胞的隸屬固有免疫的T細(xì)胞，通常位于人體的皮膚、粘膜

10、局部和腹腔等部位，發(fā)揮重要的抗感染和抗腫瘤功能。近期在腫瘤免疫領(lǐng)域，在幾種不同的腫瘤如肝癌和腸癌，均報(bào)道γδT細(xì)胞是腫瘤局部IL-17A的最主要來源，且發(fā)揮促進(jìn)腫瘤生長轉(zhuǎn)移的重要作用。在若干感染模型中，γδT細(xì)胞則被認(rèn)為對(duì)于局部招募嗜中性粒細(xì)胞、清除局部病原體十分重要。這促使我們對(duì)IL-17A在VMC發(fā)病中的功能進(jìn)行重新的深入的認(rèn)識(shí)。通過預(yù)實(shí)驗(yàn)，我們首先證實(shí)了CVB3感染早期（3天），心臟出現(xiàn)γδT細(xì)胞的免疫浸潤，同時(shí)證實(shí)該群固有免疫細(xì)

11、胞的確分泌高水平的IL-17A，提示我們重新深入研究γδT細(xì)胞來源的IL-17A在柯薩奇病毒性心肌炎中的功能和意義具有創(chuàng)新性，有助于糾正過去片面認(rèn)為只有 Th17分泌IL-17A而導(dǎo)致VMC發(fā)生的思路。并對(duì)未來基于γδT細(xì)胞的VMC免疫治療新策略產(chǎn)生積極的作用。
　　基于以上，我們提出研究的科學(xué)假設(shè)：作為在急性柯薩奇病毒性心肌炎發(fā)病中扮演關(guān)鍵促炎作用的IL-17A，其在心臟局部的來源除了已證實(shí)的CD4+Th17外，還有另外一群重要

12、的固有免疫細(xì)胞---γδT，且γδT細(xì)胞出現(xiàn)在心臟局部的時(shí)間早于CD4+Th細(xì)胞，則其固有免疫作用特別是分泌IL-17A的作用早于CD4+Th細(xì)胞，很可能發(fā)揮更為重要的抗感染和促炎作用，可能是解析急性病毒性心肌炎的發(fā)病機(jī)制的一個(gè)新途徑和新思路。擬在CVB3感染C57BL/6小鼠的急性心肌炎模型基礎(chǔ)上，首先檢測心臟局部IL-17A的分泌動(dòng)力學(xué)，通過IL-17A KO小鼠證實(shí)IL-17A的關(guān)鍵作用；隨后通過流式細(xì)胞術(shù)在CVB3感染早期（3天

13、）和急性期（7天）檢測和確證分泌IL-17A的免疫細(xì)胞格局，其中γδT細(xì)胞分泌IL-17A的亞群格局；進(jìn)一步通過TCRδ KO小鼠和Vγ4中和抗體通過清除γδT細(xì)胞，直接證明γδT細(xì)胞和分泌IL-17A的Vγ4γδT細(xì)胞在急性VMC發(fā)病中的作用。最后通過檢測IL-17A通路下游的趨化因子、嗜中性粒細(xì)胞浸潤等功能來確認(rèn)γδT17細(xì)胞浸潤心臟局部后的多種促炎機(jī)制。
　　第一部分：IL-17A在急性病毒性心肌炎發(fā)病中起關(guān)鍵作用
　

14、　一、CVB3小鼠病毒性心肌炎模型的建立
　　以CVB3感染小鼠建立的VMC動(dòng)物模型與臨床VMC病患特征相似。經(jīng)劑量摸索，以1~1.5╳103 TCID50的CVB3經(jīng)腹腔感染C57BL/6雄性小鼠，發(fā)現(xiàn)感染后第3天開始小鼠體重明顯下降，7天體重下降率達(dá)20%；且7天小鼠死亡率為30~60%。第7天小鼠心臟石蠟切片H.E染色顯示：正常小鼠心肌細(xì)胞完整無炎癥，而 CVB3感染小鼠心臟內(nèi)呈炎性細(xì)胞浸潤和局灶性心肌細(xì)胞壞死，提示已成功建

15、立了CVB3感染C57BL/6誘導(dǎo)的急性VMC小鼠模型。
　　二、VMC小鼠心臟內(nèi)IL-17A分泌的動(dòng)力學(xué)
　　為檢測CVB3感染后IL-17A的水平和變化動(dòng)力學(xué)，在CVB3感染后0-7天，ELISA法檢測了小鼠心臟和腸道各器官的IL-17A及其他炎癥細(xì)胞因子的水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：未感染時(shí)小鼠各器官內(nèi)檢測不到IL-17A，而CVB3感染后IL-17A水平在心臟和腸道均顯著增高。同時(shí)感染第7天心臟炎癥細(xì)胞因子TNFα、IL-6、I

16、FNγ等水平均顯著增高，提示了包括IL-17A在內(nèi)的炎癥細(xì)胞因子在心肌炎發(fā)病中發(fā)揮重要作用。同時(shí)CVB3病毒復(fù)制水平也在第3天達(dá)到高峰。
　　三、IL-17A-/-小鼠在CVB3感染后的心肌炎發(fā)病情況
　　為直接證實(shí)IL-17A在急性CVB3心肌炎發(fā)病中的作用，利用IL-17A KO小鼠，經(jīng)CVB3感染觀察小鼠VMC的發(fā)病情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與WT小鼠相比，感染第7天IL-17A-/-小鼠體重減輕顯著降低，血清CK-MB水平顯著

17、減少，組化顯示心臟組織中炎性細(xì)胞浸潤顯著降低。ELISA證實(shí)IL-17A-/-小鼠第7天的TNF-α等顯著降低，IL-17檢測不到；而 IFN-γ水平顯著增加。病毒復(fù)制水平有少量增高。提示IL-17A-/-小鼠感染CVB3后心肌炎顯著減輕，IL-17A在急性VMC發(fā)病中確實(shí)發(fā)揮非常關(guān)鍵的促炎作用。
　　第二部分γδT細(xì)胞是VMC小鼠心臟局部IL-17A的重要來源
　　一、CVB3感染急性期心臟局部同時(shí)存在CD4+Th和γδT

18、細(xì)胞浸潤
　　已知IL-17A的主要細(xì)胞來源包括CD4+Th細(xì)胞和γδT細(xì)胞。為此，在CVB3感染建立的C57BL/6小鼠急性VMC模型中，于0、3、7天分別檢測了兩種免疫細(xì)胞在小鼠心臟的浸潤。流式檢測發(fā)現(xiàn)：未感染情況下小鼠心臟內(nèi)幾乎沒有免疫細(xì)胞，而在感染3、7天，心臟組織均可檢測到兩種免疫細(xì)胞的顯著增高的浸潤。其中：γδT細(xì)胞率先進(jìn)入心臟，在第4天浸潤達(dá)到高峰，比例達(dá)到5.35%，而細(xì)胞絕對(duì)數(shù)達(dá)到104，顯著高于對(duì)照組；而CD4

19、+Th細(xì)胞則隨時(shí)間進(jìn)展，浸潤數(shù)目不斷增高，于第7天達(dá)到高峰，比例達(dá)13.4%，數(shù)目達(dá)106。提示兩種免疫細(xì)胞均進(jìn)入心臟組織發(fā)揮炎癥作用，但動(dòng)力學(xué)有時(shí)間差異。
　　二、心臟組織內(nèi)分泌IL-17A的免疫細(xì)胞包括CD4+Th細(xì)胞和γδT細(xì)胞
　　通過流式細(xì)胞術(shù)，可將浸潤于心臟組織內(nèi)的免疫細(xì)胞進(jìn)行表型和功能的分類。以IL-17A陽性細(xì)胞設(shè)門，再分別檢測其中的CD4+細(xì)胞和γδT細(xì)胞比例。發(fā)現(xiàn)：CD4+T細(xì)胞和γδT細(xì)胞均能分泌IL-

20、17A：其中γδT細(xì)胞約占60%，而Th17細(xì)胞占35%；提示急性VMC發(fā)病中心臟浸潤的兩類免疫細(xì)胞均顯著分泌IL-17A，其中γδT細(xì)胞分泌IL-17A的水平與CD4+Th17相仿或者更高。
　　三、心臟組織內(nèi)分泌IL-17A的γδT細(xì)胞的亞群及其體內(nèi)動(dòng)力學(xué)
　　在心臟組織第4天達(dá)到峰值的浸潤γδ T細(xì)胞中，檢測了兩個(gè)主要的γδT細(xì)胞亞群Vγ1和Vγ4的比例和特性，發(fā)現(xiàn)：1）急性期（第4天）心臟中γδ T細(xì)胞亞群Vγ1和V

21、γ4都有浸潤，且比例相當(dāng)；2）第4天心臟浸潤γδT細(xì)胞中，分泌IL-17A的主要是Vγ4γδT細(xì)胞；3）Vγ4γδT細(xì)胞和Vγ1γδT細(xì)胞在心臟浸潤的動(dòng)力學(xué)相當(dāng)。
　　綜上，小鼠急性VMC過程中，心臟IL-17A的來源除Th17細(xì)胞，固有免疫細(xì)胞Vγ4γδT細(xì)胞也是重要來源，且分泌IL-17A能力略高于CD4+Th17細(xì)胞。在感染早期心臟浸潤的IL-17A+γδ T（Vγ4γδ T亞群）細(xì)胞可能在VMC發(fā)病中扮演非常關(guān)鍵的作用。<

22、br>　　第三部分：IL-17A+γδT細(xì)胞在病毒性心肌炎發(fā)病中的作用
　　一、以TCRδKO小鼠證實(shí)γδT細(xì)胞在VMC發(fā)病中的作用
　　首先利用TCRδKO小鼠直接證實(shí)γδT細(xì)胞在VMC發(fā)病中的作用。以CVB3感染TCRδ KO小鼠，發(fā)現(xiàn)：γδT細(xì)胞缺失小鼠VMC發(fā)病顯著降低，心臟炎癥浸潤和損傷顯著減少；心臟局部炎性細(xì)胞因子IL-17A、TNF-α和IL-6水平均顯著降低；病毒載量變化不顯著。提示γδT細(xì)胞在心肌炎發(fā)病中發(fā)

23、揮重要促炎作用。
　　二、以中和抗體清除IL-17A+Vγ4γδT細(xì)胞證實(shí)其在VMC發(fā)病中的作用
　　利用特異性Vγ4中和抗體于-5、-1天尾靜脈注射小鼠兩次，清除體內(nèi)Vγ4γδT細(xì)胞，再以CVB3感染檢測急性VMC發(fā)病。結(jié)果顯示：1）Vγ4中和抗體清除脾臟和心臟的Vγ4γδT的效率為95%；2）剔除Vγ4γδT細(xì)胞后，急性心肌炎顯著減輕，CK-MB值顯著降低；3）心臟微環(huán)境炎癥細(xì)胞因子IL-17A、TNF-α、IL-6和I

24、FN-γ水平顯著降低；4）心臟病毒載量在感染第3天非常顯著增加。提示 Vγ4T細(xì)胞在急性VMC發(fā)病中發(fā)揮重要的促炎、但抑制毒復(fù)制作用。
　　三、過繼轉(zhuǎn)輸γδT細(xì)胞觀察γδT來源的IL-17A對(duì)VMC的作用。
　　分別體外培養(yǎng)純度高于60%的正常和IL-17A-/-KO小鼠來源γδT細(xì)胞，尾靜脈回輸TCRδKO小鼠，而后感染CVB3，發(fā)現(xiàn)：IL-17A-/-KO小鼠來源γδT細(xì)胞輸注的小鼠的VMC的發(fā)病及心肌炎癥顯著減少；提示

25、給TCRδKO小鼠補(bǔ)充回復(fù)不能分泌IL-17A的γδT細(xì)胞，VMC炎癥顯著減輕。提示γδT在VMC發(fā)病中的重要促炎作用通過IL-17A實(shí)現(xiàn)。
　　四、分別清除γδ T、Vγ1、Vγ4γδ T和CD4+Th細(xì)胞評(píng)價(jià)CD4+Th17和γδT細(xì)胞對(duì)VMC心臟炎癥的貢獻(xiàn)
　　上述研究結(jié)果證實(shí)Vγ4γδT促進(jìn)VMC炎癥的作用通過IL-17A實(shí)現(xiàn)。然而，我們也證實(shí)CVB3感染早期γδT與Th17幾乎以相似規(guī)模浸潤于心臟，并同時(shí)分泌IL-

26、17A，則如何評(píng)估兩種IL-17A+T細(xì)胞在VMC發(fā)病中的作用成為一個(gè)重要的但比較困難的科學(xué)問題。為此，擬分別以抗γδTCR、Vγ1、Vγ4、CD4四種中和抗體清除體內(nèi)γδ T、Vγ1、Vγ4和CD4+Th細(xì)胞，同期評(píng)價(jià)CD4+Th17和γδT細(xì)胞對(duì)VMC心臟炎癥的貢獻(xiàn)。該實(shí)驗(yàn)?zāi)壳吧性谶M(jìn)展中。
　　五、γδT細(xì)胞亞群Vγ1、Vγ4的相互調(diào)節(jié)作用在VMC發(fā)病中的作用
　　已知γδT兩個(gè)主要亞群Vγ1和Vγ4可能分泌不同的細(xì)胞因

27、子發(fā)揮相反的調(diào)控作用。而前述已證實(shí)CVB3感染早期兩種γδT以相似比例同時(shí)浸潤于心臟，我們發(fā)現(xiàn)：1）Vγ4主要分泌 IL-17A，而Vγ1則分泌 IFN?，且該能力隨 CVB3感染0-7天顯著增強(qiáng)，接近 CD4+Th1。2）通過 Vγ1中和抗體清除試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)使心肌炎加重（結(jié)果未顯示），提示Vγ1γδT在急性VMC發(fā)生中起保護(hù)作用。3）發(fā)現(xiàn)Vγ4中和抗體清除體內(nèi)Vγ4γδT細(xì)胞后，導(dǎo)致Vγ1細(xì)胞近2倍的代償性增高，提示兩種gδT亞群可互相調(diào)

28、節(jié)，后續(xù)試驗(yàn)仍在進(jìn)行中。綜上，CVB3感染早期浸潤于心臟的γδT細(xì)胞在VMC發(fā)生中起重要的促炎作用，其Vγ4γδ T亞群通過分泌IL-17A促進(jìn)炎癥而發(fā)揮有害作用；而Vγ1γδT通過分泌IFNγ可能調(diào)控Vγ4γδT而起保護(hù)功能。
　　第四部分：細(xì)胞促進(jìn)CVB3病毒性心肌炎的機(jī)制探討
　　IL-17A可作用于多種細(xì)胞表面的IL-17RA受體，發(fā)揮多種效應(yīng)作用。我們考慮心臟顯著上調(diào)的IL-17A，特別是Vγ4γδT17細(xì)胞分泌的

29、IL-17A，可能通過調(diào)控嗜中性粒細(xì)胞的心臟浸潤發(fā)揮后續(xù)的抗病毒和促炎功能。
　　一、γδT17分泌的IL-17A對(duì)于靶細(xì)胞的趨化因子分泌的上調(diào)作用
　　首先檢測了IL-17A對(duì)心肌細(xì)胞和脾臟細(xì)胞的趨化因子分泌的調(diào)節(jié)作用。以IL-17A刺激原代心肌細(xì)胞和脾臟細(xì)胞，RT-PCR法檢測趨化因子的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)：IL-17A作用的原代心肌細(xì)胞顯著上調(diào)CXCL1、CXCL2和CXCL3；而脾臟細(xì)胞顯著上調(diào) CXCL2和 CXCL3。隨后

30、我們純化了脾臟中的嗜中粒細(xì)胞，擬近期以Transwell檢測IL-17A對(duì)脾臟嗜中粒細(xì)胞的趨化作用檢測其表面CXCR2、CXCR5等受體的表達(dá)。目前結(jié)果提示心臟局部早期浸潤的IL-17A+γδT細(xì)胞分泌的IL-17A，可促進(jìn)CXCL1、CXCL2和CXCL3趨化因子分泌，從而招募外周免疫細(xì)胞趨化到心臟而加劇急性心肌炎。
　　二、γδT17對(duì)嗜中性粒細(xì)胞心臟浸潤的促進(jìn)作用
　　IL-17A-IL-17RA通路的另一重要效應(yīng)是趨

31、化嗜中性粒細(xì)胞浸潤及功能的激活。我們檢測了CVB3感染小鼠心臟嗜中性粒細(xì)胞浸潤，發(fā)現(xiàn)：1）感染第3、7天均可見脾臟和心臟局部的Ly6G+CD11b+嗜中粒細(xì)胞浸潤顯著增加，且感染第3天比例最為顯著。2）已純化脾臟來源嗜中粒細(xì)胞，擬進(jìn)行 Transwell實(shí)驗(yàn)，預(yù)期IL-17A及體外培養(yǎng)的IL-17A+γδT細(xì)胞，均可有效趨化脾臟嗜中粒細(xì)胞和CD4+Th細(xì)胞。
　　三、清除γδT17對(duì)嗜中性粒細(xì)胞心臟浸潤的影響
　　以Vγ4中

32、和抗體作用小鼠體內(nèi)清除IL-17A+Vγ4γδT細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)CVB3感染后第3天心臟浸潤的嗜中粒細(xì)胞顯著減少5倍，證實(shí)心臟局部早期浸潤的IL-17A+γδT細(xì)胞分泌的IL-17A，可促進(jìn)中性粒細(xì)胞趨化到心臟發(fā)揮免疫炎癥作用。后續(xù)正在進(jìn)行心臟浸潤的嗜中粒細(xì)胞吞噬和促炎功能的研究。
　　綜上，在CVB3感染導(dǎo)致的急性病毒性心肌炎發(fā)病過程中，本研究創(chuàng)新性提出心臟局部早期浸潤的γδT細(xì)胞是IL-17A的重要來源，并在VMC發(fā)病中發(fā)揮關(guān)鍵作用

33、。我們通過多種KO小鼠和中和抗體清除試驗(yàn)，證實(shí)CVB3感染7天的急性VMC過程中，γδT細(xì)胞和CD4+Th細(xì)胞均浸潤進(jìn)入心臟，分別在第3、7天達(dá)到高峰；兩群細(xì)胞均分泌IL-17A，但Vγ4γδT細(xì)胞早于CD4+Th17細(xì)胞進(jìn)入心臟，且分泌IL-17A的能力高于Th17；體內(nèi)清除γδT或者Vγ4γδT細(xì)胞均可顯著減輕急性心肌炎和心臟炎癥細(xì)胞因子水平；γδT細(xì)胞的另一個(gè)亞群Vγ1γδT細(xì)胞同時(shí)浸潤于心臟，但通過分泌IFNγ對(duì)Vγ4γδT細(xì)胞

34、發(fā)揮調(diào)控作用。CD4+Th17細(xì)胞和Vγ4γδT細(xì)胞作為CVB3感染后心臟局部分泌 IL-17A的主要細(xì)胞亞群，共同促進(jìn)了急性VMC的發(fā)生。IL-17+Vγ4γδT細(xì)胞促進(jìn)心肌炎的細(xì)胞與分子機(jī)制與其上調(diào)心肌細(xì)胞分泌趨化因子 CXCL1/2/3從而促進(jìn)嗜中性粒細(xì)胞浸潤心臟相關(guān)。我們的研究創(chuàng)新性地發(fā)現(xiàn)了IL-17A+Vγ4γδT細(xì)胞（γδT17）在急性VMC發(fā)生中扮演重要促炎作用，并初步闡明其效應(yīng)與IL-17A-IL-17R通路介導(dǎo)的嗜中粒