髓系細(xì)胞促發(fā)受體-1(TREM-1)在急性病毒性心肌炎中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　病毒性心肌炎是由病毒感染引起的心肌非特異性炎癥反應(yīng)及隨后的心肌細(xì)胞損傷，它的病理過程主要是與病毒對(duì)心臟的直接損傷和機(jī)體的自身免疫反應(yīng)有關(guān)。天然和獲得性免疫參與了病毒性心肌炎心肌損傷、慢性化及其擴(kuò)張性心肌病的病理發(fā)生發(fā)展過程。病毒感染心臟后，可誘導(dǎo)大量炎癥細(xì)胞浸潤，炎性細(xì)胞因子分泌，如干擾素家族、白細(xì)胞介素家族、腫瘤壞死因子等均參與心肌炎的發(fā)生發(fā)展過程，然而其詳盡機(jī)制尚不明確，到目前為止，尚無特異性治療方法。因此，揭示病

2、毒性心肌炎發(fā)病過程中炎癥和免疫反應(yīng)的相互關(guān)系，以及其可能的機(jī)制，并進(jìn)一步探討有效治療方案則成為病毒性心肌炎的研究熱點(diǎn)。
　　第一部分小鼠急性病毒性心肌炎模型的建立
　　目的：建立小鼠急性病毒性心肌炎模型，為進(jìn)一步的研究發(fā)病機(jī)制和治療手段提供理想的動(dòng)物模型。
　　方法：采用科薩奇B組3型病毒(CVB3)腹腔注射，接種BALB/c小鼠，建立小鼠急性病毒性心肌炎模型。BALB/c4周齡雄性小鼠50只，隨機(jī)分為模型組(40只)

3、和正常對(duì)照組(注射Eagle液0.3ml，10只)，模型組予腹腔接種CVB30.3ml。在接種病毒后第0、3、5、7、14、28天分別處死小鼠，觀察心肌病理形態(tài)學(xué)改變。
　　結(jié)果：模型組小鼠心肌HE染色可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤和心肌壞死等炎癥改變，而對(duì)照組心肌無任何炎性細(xì)胞浸潤或心肌壞死。
　　結(jié)論：CVB3腹腔注射可誘導(dǎo)建立理想的心肌炎模型。
　　第二部分 TREM-1在急性病毒性心肌炎中的作用及其可能機(jī)制研究

4、　　目的：研究TREM-1、MyD88在急性病毒性心肌炎心肌組織中的表達(dá)。
　　方法：BALB/c4周齡雄性小鼠80只，隨機(jī)分為模型組(60只)和正常對(duì)照組(20只)，模型組予腹腔接種柯薩奇病毒B組3型(CVB3)建立小鼠急性病毒性心肌炎模型。光鏡觀察心肌病理形態(tài)學(xué)改變，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)及ELISA技術(shù)，檢測各組小鼠心肌組織或血清中TREM-1、MyD88、TNF-α和IL-1基因水平及蛋白水平的變化，并用超聲技術(shù)檢測

5、小鼠心功能，Tunel技術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：與正常組比較，模型組小鼠心肌HE染色可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤和心肌壞死等炎癥改變，TREM-1、TNF、IL-1 mRNA和蛋白水平以及MyD88蛋白水平顯著升高，心肌細(xì)胞凋亡明顯增多，心功能指標(biāo)EF、FS降低。
　　結(jié)論：病毒性心肌炎模型中，炎性細(xì)胞因子TNF、IL-1和炎癥放大介質(zhì)TREM-1及其下游蛋白MyD88在mRNA、蛋白水平的表達(dá)都發(fā)生改變，伴隨心功能和

6、心肌細(xì)胞凋亡的變化，TREM-1和下游蛋白MyD88蛋白變化可能與病毒性心肌炎炎癥放大作用有關(guān)。
　　第三部分 LP-17對(duì)小鼠急性病毒性心肌炎的干預(yù)作用
　　目的：觀察LP-17對(duì)CVB3誘導(dǎo)的病毒性心肌炎的作用并研究其可能機(jī)制。方法：BALB/c4周齡雄性小鼠70只，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、LP-17對(duì)照組(以上兩組均予以不含病毒的Eagle's液腹腔注射)、模型組和LP-17治療組和(以上兩組予以柯薩奇病毒腹腔接種)。其中

7、LP-17治療組在病毒接種第3、5天，分別給予腹腔注射LP-17200μg。接種后的第7天處死所有小鼠，取小鼠心臟行組織病理學(xué)染色，觀察小鼠心肌病理形態(tài)學(xué)改變；采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)和ELISA技術(shù)，檢測各組小鼠心肌中或血清中TNF-α、IL-1、TREM-1、MyD88在mRNA和蛋白表達(dá)的變化；同時(shí)采用心臟超聲技術(shù)觀察心功能變化，利用Tunel技術(shù)觀察心肌組織凋亡情況。
　　結(jié)果：模型組小鼠心肌HE染色可見明顯的炎性

8、細(xì)胞浸潤和心肌壞死斷裂等炎癥改變；心功能指標(biāo)EF和FS顯著減低；心肌細(xì)胞凋亡明顯增多。而LP-17治療組炎癥改變均有明顯減輕；心功能指標(biāo)改善；心肌細(xì)胞凋亡減少。TNF-α、IL-1mRNA水平均較模型組下降。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各個(gè)觀察指標(biāo)P值均<0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TNF-α、IL-1血清蛋白水平變化與心肌基因水平變化相一致。模型組心肌組織MyD88表達(dá)明顯升高，而在LP-17治療組，MyD88mRNA和蛋白水平表達(dá)量均顯著減低，差