先天性心臟病患兒CITED2基因突變及22q11微缺失的研究.pdf

1、背景：先天性心臟病(congenital heart disease，CHD)是胎兒時期心臟血管發(fā)育異常所致的心血管畸形，也是小兒最常見的心臟病。其臨床后果極為嚴重，通常導致流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)、新生兒死亡，以及兒童、青少年和成人殘疾。CHD發(fā)生率在城市地區(qū)一直高居首位，在農(nóng)村地區(qū)僅次于神經(jīng)管畸形，位于第二位，給家庭和社會造成嚴重的經(jīng)濟和精神等方面的負擔。雖然目前CHD遺傳基礎的研究已取得了很多進展，但是由于CHD種類繁多、病因復雜，大多數(shù)

2、CHD的病因尚未清楚，急需人們多層次、多水平、深入全面綜合地探討。
　　 目的：分析CHD患兒的CITED2基因編碼鏈突變的情況；檢測CHD患兒22q11微缺失的發(fā)病及分布情況，探討多重連接依賴式探針擴增技術(multiplexligation-dependent probe amplification，MLPA)用于診斷CHD22q11微缺失的可行性。
　　 方法：以2010～2011年河南省胸科醫(yī)院及鄭州市兒童醫(yī)院收

3、集的300例散發(fā)型CHD患兒為研究對象。300例患兒均為漢族，且均經(jīng)臨床、心臟彩超、手術確診。50例正常男童及50例正常女童作為本研究的正常對照，均無CHD病史及家族史。使用非試劑盒方法提取外周血基因組DNA，對CITED2基因進行聚合酶鏈反應并測序，測序結果與GeneBank數(shù)據(jù)庫公布的CITED2基因序列(NM006079.3)進行比較以識別基因突變。用Clustal X軟件分析突變氨基酸的保守性。
　　 采用MLPA P2

4、50試劑盒(共48對探針)對120例CHD患兒進行22q11微缺失檢測。所有反應在PCR儀上進行：DNA樣品與48對探針雜交16 h，然后用連接酶連接半探針，最后用統(tǒng)一的SALSA PCR引物對連接的半探針進行PCR擴增。使用毛細管電泳儀(CEQ8800)和與之配套的軟件(CEQ system)來分離和分析PCR產(chǎn)物。將CEQ system分析后的數(shù)據(jù)轉換為Excel格式，最后使用MRC-Holland公司提供的分析軟件Coffalys

5、er v9.4來分析數(shù)據(jù)。10例正常兒童作為分析對照。
　　 結果
　　 1.300例CHD患兒中，有5例(1.67％)檢測出CITED2基因突變。其余295例(98.33%)沒有檢測出突變。新發(fā)現(xiàn)了兩種新的突變(c.481-483delAGC，c.574-579delAGCGGC)。
　　 2.120例CHD患兒中，檢出22q11微缺失10例(8.33%)，重復1例(0.83%)，其余109例(90.84%)沒

6、有檢測到缺失或重復。10例缺失中，3Mb缺失9例，2Mb缺失1例，包括室間隔缺損3例，法洛四聯(lián)癥5例，肺動脈狹窄1例，右室雙出口1例。1例重復CHD類型為肺動脈狹窄。
　　 結論
　　 1.在CHD患兒CITED2基因中發(fā)現(xiàn)兩種突變，兩種突變均為國際首次報道。多物種序列對比分析表明CITED2第161、192和193位氨基酸呈現(xiàn)一定的保守性，提示這兩種新突變可能通過改變SGJ區(qū)蛋白構象導致人類CHD的發(fā)生。