腫瘤相關(guān)抗原SC的分離純化及其特性分析.pdf

1、目的：惡性腫瘤是對(duì)人類身體健康威脅最大，且死亡率最高的疾病之一。目前，傳統(tǒng)的手術(shù)、放療和化療等方法的療效均不理想。其原因主要是因?yàn)閷?duì)惡性腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和免疫逃避等機(jī)制的研究仍不十分清楚。近年來，隨著分子生物學(xué)理論和技術(shù)的發(fā)展，大量實(shí)驗(yàn)表明，對(duì)腫瘤相關(guān)抗原(tumorassociatedantigen，TAA)的研究，是解決上述問題的途徑之一。這不但對(duì)于腫瘤的基礎(chǔ)研究意義重大，同時(shí)也是癌癥早期免疫診斷和主動(dòng)免疫治療的先決條件。20世紀(jì)8

2、0年代以來，隨著CTL篩選法和重組cDNA表達(dá)文庫血清分析法等腫瘤抗原鑒定方法的逐步發(fā)展和完善，大量具有臨床應(yīng)用價(jià)值的腫瘤排斥抗原被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，極大地促進(jìn)了這一領(lǐng)域的研究進(jìn)展。 SC抗原(SCAg)作為新近研究的一組TAA，在胰腺、大腸、小腸、胃和乳腺等上皮性腫瘤組織中呈高表達(dá)，而在正常組織中無表達(dá)。這不僅是研制新型腫瘤疫苗的理想抗原，而且對(duì)上皮性腫瘤的病因?qū)W、病理學(xué)和免疫學(xué)等基礎(chǔ)研究具有十分重要的意義。本研究通過免疫沉淀等技術(shù)，

3、對(duì)單克隆抗體(monoclonalantibody，MAb)SC11和SC12識(shí)別的相應(yīng)抗原，即SCAg11和SCAg12進(jìn)行分離、純化，并對(duì)其基本特性進(jìn)行分析。旨在為其進(jìn)一步的研究和新型腫瘤疫苗的制備等奠定理論和物質(zhì)基礎(chǔ)。 方法：腹水單克隆抗體用10～12周齡雌性BALB/c小鼠制備，其雜交瘤細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室研制。腫瘤及正常組織標(biāo)本取自我院普通外科大腸癌病人手術(shù)切除組織。免疫沉淀試劑盒為美國(guó)Perice公司產(chǎn)品。 BAL

4、B/c小鼠腹腔注射降植烷0.5m1后常規(guī)飼養(yǎng)備用。復(fù)蘇液氮中凍存的雜交瘤細(xì)胞，常規(guī)培養(yǎng)和傳代。收獲細(xì)胞懸液以5×105～5×106個(gè)細(xì)胞/只小鼠，注入預(yù)處理10天以上的BALB/c小鼠腹腔。待其生成大量腹水后，抽取腹水離心取上清，-20℃凍存?zhèn)溆?。用?jīng)免疫組織化學(xué)染色與抗SCAg單克隆抗體反應(yīng)呈陽性的癌組織，經(jīng)勻漿、離心和透析制備成粗提抗原，然后通過免疫沉淀進(jìn)行分離、純化。最后以SDS-PAGE、Westernblot和ELISA等方法

5、對(duì)所獲抗原進(jìn)行鑒定。結(jié)果：免疫組織化學(xué)染色顯示，SCAg11及SCAg12蛋白在結(jié)腸癌細(xì)胞中呈強(qiáng)表達(dá)，主要位于細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)中。經(jīng)純化的SCAg11和SCAg12，通過SDS-PAGE均顯示一條帶，其分子量分別約為65.8kD和67.4kD。Westernblot與其相應(yīng)抗SCAg單克隆抗體反應(yīng)呈陽性，而甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)、人血清白蛋白(humanserumalbumin，HSA)、癌胚抗原(arci

6、no-embryonicantigen，CEA)、SCAg6以及正常組織抗原對(duì)照均為陰性，且在SCAg11及SCAg12之間無交叉反應(yīng)。ELISA檢測(cè)結(jié)果與Westernblot完全相同。 結(jié)論：本研究通過免疫沉淀等技術(shù)，成功地獲取了SCAg11及SCAg12高純度的腫瘤相關(guān)抗原純品。SDS-PAGE顯示，SCAg11和SCAg12的分子量分別約為65.8kD和67.4kD。SCAg11及SCAg12抗原之間，以及二者與AFP、