苦瓜蛋白的分離純化及其抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的:
　　 惡性腫瘤是嚴重危害人類健康和社會發(fā)展的疾病之一，近年來其發(fā)生率和死亡率呈逐年上升，盡管目前在腫瘤治療方面取得很大進展，但仍以藥物化療和放療為主，這些治療方法在殺死腫瘤細胞的同時對機體正常細胞和免疫系統也產生了嚴重損傷。近年來，從天然植物中尋找新的抗腫瘤藥物成為許多研究者的目標。我們研究從苦瓜種子中純化得到具有活性的苦瓜蛋白，并對其抗腫瘤作用機制進行初步的探討。
　　 方法:
　　 1.將去殼苦瓜種子

2、運用丙酮分級沉淀法制備苦瓜蛋白粗提物，采用強陽離子交換層析柱(SP Sepharose High Performance)和G-75凝膠過濾分離純化，純化產物經SDS-PAGE鑒定分子量和純度，質譜儀鑒定蛋白成分。
　　 2.將純化的苦瓜蛋白作用于k562、U937細胞株，采用cck-8法研究其生長抑制作用，HDAC試劑盒和RT-PCR檢測對腫瘤細胞HDAC活性和HDAC1基因表達的影響。
　　 結果:
　　 1

3、.經強陽離子交換和G-75凝膠過濾后得到蛋白組分經質譜鑒定為α-MMC，分子量均在29kDa左右。
　　 2.α-MMC對K562和U937細胞株具有抑制作用，10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml和50ug/ml的苦瓜蛋白作用K562細胞48小時的抑制率分別為22.1％、53.4％、60.1％、74.3％和85.5％，10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml和50ug/ml的苦瓜蛋

4、白作用U937細胞48小時的抑制率分別為15.6％，34.9％、42.3％、48.1％和55.9％。
　　 3.20ug/ml和40ug/mlα-MMC作用K562細胞株48h小時后，HDAC活性分別下降38.5％和46.2％。
　　 4.苦瓜蛋白作用K562細胞株24h后，HDAC1基因的mRNA下調27.2％(P＜0.05)，HDAC2基因的mRNA下調11.0％(P＜0.05)，HDAC3基因的mRNA上調1.4％