小鼠胚胎脊髓運動神經(jīng)元發(fā)育相關(guān)基因表達的時空分布及miRNA預測.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分、Olig2和Hb9在小鼠胚胎脊髓中表達變化
　　 目的：探討小鼠胚胎脊髓運動神經(jīng)元在發(fā)育與分化過程中堿性-螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子(basic helix-loop-helix，bHLH)Olig2和同源盒基因(Homeobox，Hb9)表達的時空分布情況。有利于了解運動神經(jīng)元發(fā)育和分化的模式，尋找運動神經(jīng)元數(shù)量發(fā)育高峰，為下一步分離足量的運動神經(jīng)元，應用于脊髓運動神經(jīng)元miRNA芯片打

2、下基礎(chǔ)。
　　 方法：選擇小鼠的9.5天-13.5天胚胎脊髓，分為E9.5d組、E10.5d組、E11.5d組、E12.5d組、E13.5d組。采用免疫熒光的方法分別檢測Olig2和Hb9在這五組胎鼠脊髓中的表達情況，同時應用流式細胞儀分別檢測五組胎鼠脊髓Olig2和Hb9表達的陽性率。
　　 結(jié)果：免疫熒光染色顯示在這五組胎鼠脊髓的腹側(cè)都可見Olig2和Hb9的表達，流式細胞學結(jié)果顯示E9.5d組Olig2表達的陽性率

3、高于其它四組，差異有統(tǒng)計學意義，(p<0.05)，E11.5d組Hb9表達的陽性率高于其它四組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　 結(jié)論：Olig2和Hb9在胎鼠脊髓運動神經(jīng)元細胞的發(fā)育過程中起著很重要的作用，運動神經(jīng)元在E11.5d數(shù)量上達到高峰。
　　 第二部分、脊髓運動神經(jīng)元發(fā)育miRNA預測
　　 目的：miRNAs是一類非編碼的小RNAs，它通過抑制基因表達的方式調(diào)節(jié)各種細胞的功能。預測可能參與調(diào)

4、控脊髓運動神經(jīng)元發(fā)育的miRNAs，為下一步實驗提供理論依據(jù)。
　　 方法：采用生物信息學工具(Pictar，Targetscan，Sanger程序)查找已經(jīng)從小鼠細胞系MN-1中克隆出40種miRNAs的靶基因，利用pubmed檢索靶基因的功能，篩選出與運動神經(jīng)元發(fā)育有關(guān)的miRNAs。
　　 結(jié)果：miR-16，miR-103，miR-19a，miR-23b，miR-27，miR-203，miR-206分別在調(diào)節(jié)運動