整合素α5β1在膝骨關(guān)節(jié)炎不同退變程度關(guān)節(jié)軟骨中的差異性表達(dá).pdf

1、目的:骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)是一種退行性關(guān)節(jié)疾病，主要病理表現(xiàn)為關(guān)節(jié)軟骨的退變，好發(fā)于中老年，膝關(guān)節(jié)常受累。隨著世界人口老齡化進(jìn)程的加速，OA的發(fā)病率逐年上升，已成為中老年人致殘的重要原因之一，給患者帶來極大痛苦與經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。由于OA的病因與發(fā)病機(jī)制尚不清楚，目前仍是骨科領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，整合素(Integrin)是細(xì)胞粘附分子家族的一員，存在于細(xì)胞表面，是一種跨膜蛋白，在細(xì)胞

2、粘附與信號(hào)傳導(dǎo)中起著重要作用，參與細(xì)胞形態(tài)、極性、粘附、運(yùn)動(dòng)、生長(zhǎng)、增殖、分化與凋亡等多種生理功能的調(diào)節(jié)。軟骨細(xì)胞可表達(dá)多種Integrins，成人軟骨細(xì)胞中主要表達(dá)Integrinα5β1。Integrinα5β1在軟骨細(xì)胞力學(xué)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖與分化等方面具有重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，Integrinα5β1與軟骨細(xì)胞的損傷、修復(fù)、細(xì)胞表型改變等多種軟骨病變密切相關(guān)。我們推測(cè)，Integrinα5β1在不同退變程度軟骨中可能存在差異性表達(dá)

3、，且與軟骨的退變及OA的發(fā)展相關(guān)。目前，關(guān)于Integrinα5β1在不同退變程度軟骨中的表達(dá)情況及與軟骨退變的關(guān)系缺乏相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)選取膝骨關(guān)節(jié)炎(Knee Osteoarthritis，KOA)患者股骨遠(yuǎn)端負(fù)重面不同退變程度關(guān)節(jié)軟骨，檢測(cè)其中Integrinα5β1的表達(dá)，探討Integrinα5β1在KOA不同退變程度軟骨中的表達(dá)情況及與軟骨退變的關(guān)系。
　　方法:收集KOA患者全膝關(guān)節(jié)置換術(shù)股骨遠(yuǎn)端截骨組織20例，經(jīng)大體

4、觀察，依據(jù)Outerbridge分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)選取不同退變程度軟骨標(biāo)本共40例（每例標(biāo)本沿矢狀面等分成三塊，一塊用10％中性甲醛固定，另兩塊-80℃凍藏保存），將10％中性甲醛固定的標(biāo)本脫鈣后制成石蠟組織塊，3μm切片后，常規(guī)HE染色及鏡下觀察，參照Bobinac分期，將標(biāo)本分為三組:輕度退變組（0～6分）、中度退變組（7～9分）、重度退變組（10～14分）。采用免疫組化、Real-time PCR及Western blot檢測(cè)Integri

5、nα5β1在三組不同退變程度軟骨中mRNA與蛋白水平的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS17.0軟件，三組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:本實(shí)驗(yàn)20例KOA患者股骨遠(yuǎn)端截骨順利，內(nèi)外髁負(fù)重面軟骨無人為損傷及污染，共選取軟骨標(biāo)本40例，HE染色均勻、紅藍(lán)分明、組織結(jié)構(gòu)清晰、胞漿胞核清晰可辨、鏡下觀察與判別良好，參照Bobinac分期分成三組，輕度退變組13例、中度退變組15

6、、重度退變組12例。免疫組化染色顯示:Integrinα5β1在不同退變程度軟骨中均有表達(dá);輕度退變組主要表達(dá)在軟骨淺表層與移形層;中度退變組除鈣化層周圍軟骨細(xì)胞未見明顯表達(dá)外，其余軟骨細(xì)胞均有表達(dá)，侵及軟骨潮線的血管內(nèi)皮細(xì)胞可見表達(dá);重度退變組所有軟骨細(xì)胞與侵入軟骨的血管內(nèi)皮細(xì)胞均有表達(dá)。輕度退變組呈低表達(dá)，中度退變組表達(dá)增強(qiáng)，重度退變組表達(dá)明顯增強(qiáng);免疫組化檢測(cè)結(jié)果經(jīng)Image-Pro Plus6.0軟件半定量分析，三組間比較，差異

7、性顯著(P＜0.05)。Real-time PCR與Western blot檢測(cè)顯示:Integrinα5β1的mRNA與蛋白在三組不同退變程度軟骨中均有表達(dá)，兩種方法檢測(cè)結(jié)果相同，輕度退變組呈低表達(dá)，中度退變組表達(dá)增強(qiáng)，重度退變組表達(dá)明顯增強(qiáng);Real-time PCR與Western blot檢測(cè)結(jié)果對(duì)應(yīng)經(jīng)ABI StepOne PlusReal-time PCR System與Quantity One軟件定量分析，同種方法的三組間