脂肪來源干細(xì)胞輔助下的面部軟組織輪廓重塑.pdf

1、對于為以修復(fù)重建為主要宗旨的整形外科及以年輕化為核心的美容醫(yī)學(xué)而言，再生醫(yī)學(xué)一直是備受關(guān)注與研究探索的領(lǐng)域。再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展離不開組織工程技術(shù)的支持。組織工程(tissueengineering)是應(yīng)用生命科學(xué)與工程學(xué)的原理與技術(shù)，在正確認(rèn)識哺乳動(dòng)物的正常及病理兩種狀態(tài)下的組織結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的基礎(chǔ)上，研究、開發(fā)用于修復(fù)、維護(hù)、促進(jìn)人體各種組織或器官損傷后的功能和形態(tài)的生物替代物的一門新興學(xué)科。組織工程研究最重要的基本要素之一，是種子細(xì)胞的

2、研究。怎么能獲得數(shù)量充足、功能良好、來源廣泛、取材便捷的種子細(xì)胞，成為組織工程學(xué)研究的主要對象。組織工程只需要少量的種子細(xì)胞，經(jīng)體外擴(kuò)增后與生物材料復(fù)合，就可以修復(fù)較大的組織或器官缺損，重建生理功能，為真正實(shí)現(xiàn)無損傷修復(fù)組織缺損和真正意義上的形態(tài)、結(jié)構(gòu)與功能重建開辟了新的途徑。
　　 干細(xì)胞(stemcells，SC)因其擴(kuò)增能力強(qiáng)、具有多向分化能力的特點(diǎn)，理論上可以利用少量干細(xì)胞培育出多種組織共存的組織工程產(chǎn)品，而且可以在干細(xì)

3、胞水平進(jìn)行基因修飾，然后在體外擴(kuò)增，得到同一基因型的大量分化細(xì)胞，可以做為良好的種子細(xì)胞，逐漸成為組織工程研究的主要對象。目前干細(xì)胞按照所處的發(fā)育階段分為：胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcell，ESC)和成體干細(xì)胞(somaticstemcell)。胚胎干細(xì)胞具有分化為幾乎全部組織和器官的能力，在理論上具有作為種子細(xì)胞最理想的效果。但是對于人胚胎干細(xì)胞的研究工作卻受著各種倫理學(xué)方面和法律方面因素的制約，限制了其應(yīng)用，不能成為良

4、好的種子細(xì)胞來源。在成體干細(xì)胞的研究方面，脂肪來源干細(xì)胞(Adipose-DerivedStemCells，ASCs)因其具有多向分化潛能和自我增殖能力，免疫相容性良好，來源豐富，取材容易等優(yōu)點(diǎn)，成為組織工程的種子細(xì)胞的熱點(diǎn)研究對象，具有不可多得的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。
　　 尤其對于整形外科而言，脂肪做為體形雕塑過程中的“廢棄物”，如果可以更好的利用，將為整形外科帶來更廣大的治療空間。本文主要研究從人脂肪抽吸物中提取原代的ASCs，

5、并將提取的ASCs添加入顆粒脂肪移植物中，形成脂肪-干細(xì)胞復(fù)合物，進(jìn)行自體移植，實(shí)現(xiàn)面部軟組織輪廓的重塑。希望從此研究中，可以尋求一種能將手術(shù)創(chuàng)傷減低、術(shù)中操作相對容易、術(shù)后治療效果穩(wěn)定三者更好結(jié)合的手術(shù)方式。但是ASCs在臨床中的療效仍需進(jìn)一步觀察。
　　 一、人脂肪來源干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)
　　 目的:從健康女性患者自愿捐獻(xiàn)的人脂肪抽吸物中分離培養(yǎng)出具有高成脂能力的人脂肪來源干細(xì)胞(ASCs)，并在體外進(jìn)行成脂誘導(dǎo)，為

6、標(biāo)準(zhǔn)化的脂肪來源干細(xì)胞輔助治療中的ASCs的制備提供指導(dǎo)。
　　 方法:從2例行腹部脂肪抽吸術(shù)的健康成年女性患者獲取脂肪組織，通過膠原酶消化法，分離培養(yǎng)ASCs，并進(jìn)行傳代培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)；將第三代的ASCs進(jìn)行流式鑒定，分析細(xì)胞表面標(biāo)志物特性；將第三代的ASCs進(jìn)行成脂誘導(dǎo)后，行油紅O染色，證實(shí)有無脂滴形成。
　　 結(jié)果:ASCs貼壁生長，形態(tài)為長梭形；細(xì)胞表面標(biāo)志物顯示CD105+，CD49D+，CD45-，CD3

7、1-，CD34-；ASCs體外成脂誘導(dǎo)后，見大量脂滴形成，油紅O染色陽性。
　　 結(jié)論:該方法從人脂肪抽吸物中獲得的細(xì)胞，具有ASCs的形態(tài)和表面標(biāo)志物特點(diǎn)，在體外可以經(jīng)誘導(dǎo)向脂肪細(xì)胞分化。
　　 二、脂肪來源干細(xì)胞輔助下的面部凹陷畸形治療
　　 目的:觀察將自體的顆粒脂肪與富集的含有原代脂肪來源干細(xì)胞的單個(gè)核細(xì)胞形成復(fù)合物，并將此復(fù)合物注射移植于患有面部凹陷畸形患者的面部凹陷部位得到的美容效果。
　　

8、方法:觀察及記錄接受脂肪來源干細(xì)胞輔助下面部凹陷畸形治療的16例患者的臨床資料，其中男性2人，女性14人，單側(cè)面部凹陷者10人，雙側(cè)面部凹陷者6人，共22側(cè)。采用可獲取含有原代人脂肪來源干細(xì)胞(ASCs)的單個(gè)核細(xì)胞的分離純化程序，獲取含有原代ASCs的單個(gè)核細(xì)胞，在體外與顆粒脂肪混合，靜置30min，形成脂肪-ASCs復(fù)合物，并將此復(fù)合物以螺旋可控注射器注射于面部凹陷部位。富集的含有原代ASCs的單個(gè)核細(xì)胞用細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)，算出顆粒細(xì)

9、胞總數(shù)，活細(xì)胞率，并留樣做菌培養(yǎng)，保證手術(shù)安全及質(zhì)量。術(shù)前、術(shù)后3個(gè)月、術(shù)后6個(gè)月、術(shù)后12個(gè)月均采用牙模膠覆蓋于接受手術(shù)治療的凹陷部位塑性，將所得模型用排水法測得缺損體積，并與術(shù)中記錄的治療用量體積進(jìn)行比對，算出脂肪移植的成活率。B超觀察患者術(shù)后注射部位的情況，有無結(jié)節(jié)、包塊、囊腫形成。
　　 結(jié)果:術(shù)后16例患者均獲滿意療效，隨訪12個(gè)月，記錄的數(shù)值用SPSS12.0軟件分析，每100ml脂肪可以提取富含原代ASCs的單個(gè)核

10、細(xì)胞為(2.52±0.50)×108個(gè)。配對t檢驗(yàn)，術(shù)后3月、6月、12月患者移植物體積的P值均>0.05，在α=0.05水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明術(shù)后3個(gè)月開始，脂肪成活已經(jīng)基本穩(wěn)定。脂肪移植存活率=(術(shù)前體積-術(shù)后體積)/術(shù)中體積×100％。術(shù)后3月、6月、12月脂肪移植存活率分別為(79.64±4.96)％、(82.67±6.12)％、(83.21±5.19)％，總的存活率為(81.84±5.59)％。B超檢查未見直徑大于2m的

11、結(jié)節(jié)、包塊、囊腫。
　　 結(jié)論:本手術(shù)方法安全、有效，脂肪移植后成活率高，且效果穩(wěn)定，有助于改善面部凹陷性畸形造成的軟組織輪廓改變。
　　 三、脂肪來源干細(xì)胞輔助下的面部年輕化治療
　　 目的:面部年輕化除皺手術(shù)已被廣泛應(yīng)用，其手術(shù)效果也被大家認(rèn)可和接受?？墒?，對于衰老造成的皮膚質(zhì)量下降，手術(shù)是沒有辦法糾正的。脂肪來源干細(xì)胞(ASCs)的組織修復(fù)能力已被廣泛研究，結(jié)合這樣的臨床背景，我們將ASCs應(yīng)用與接受面部年

12、輕化質(zhì)量的患者，觀察ASCs在面部年輕化治療中的效果。
　　 方法:回顧性研究我院2009年6月至2011年8月間的20例來院接受面部除皺術(shù)患者的術(shù)前、術(shù)后資料，全部為女性。其中接受脂肪來源干細(xì)胞輔助下的面部年輕化治療患者10例，為A組，采用的除皺術(shù)式為顳部除皺；單純接受除皺手術(shù)患者10例，為B組，包括全面部除皺術(shù)3例，上2/3除皺術(shù)3例，額顳部除皺術(shù)4例。不論患者是否接受脂肪來源干細(xì)胞的輔助治療，也無論患者除皺手術(shù)的范圍大小，

13、均對面中部纖維脂肪墊進(jìn)行連續(xù)懸吊處理，以排除手術(shù)方式的干擾。設(shè)定好具體的量化評分標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合VISIA專業(yè)皮膚圖像分析系統(tǒng)(美國)檢測患者術(shù)前術(shù)后患者面部情況，進(jìn)行評分比較，并針對術(shù)前術(shù)后患者的評分進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:術(shù)后隨訪3-15個(gè)月。大體評分結(jié)果，A組患者的術(shù)前評分為10.40±1.43，術(shù)后評分為1.90±0.88，B組患者的術(shù)前評分為9.70±1.89，術(shù)后評分為2.00±1.33，A組患者治療有效率為(82.45±

14、7.15)％，B組患者的治療有效率為(80.97±10.83)％。大體評分在A、B兩組組間比較的P值>0.05，在α=0.05水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明兩組患者的治療效果無明顯區(qū)別，但是A組患者接受的除皺手術(shù)創(chuàng)傷相對較小。VISIA檢測在A、B兩組進(jìn)行單獨(dú)比較，術(shù)前、術(shù)后紋理、皺紋方面的P值均<0.05，在a=0.05水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明A組與B組患者術(shù)后在紋理和皺紋方面的改善，均很顯著。斑點(diǎn)、毛孔的P值均>0.05，在a=0

15、.05水平，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明兩組患者術(shù)后在斑點(diǎn)和毛孔方面的改善，均不顯著。VISIA檢測在A、B兩組進(jìn)行組間比較，毛孔、斑點(diǎn)改善的P值均<0.05，在a=0.05水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明A組在斑點(diǎn)和毛孔方面的改善比B組明顯；兩組間在紋理、皺紋改善的P值均>0.05，在a=0.05水平，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明兩組間在皺紋和紋理的改善方面沒有明顯區(qū)別。皺紋和紋理改善結(jié)果與大體評分結(jié)論基本一致。
　　 結(jié)論:脂肪來源干細(xì)