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文檔簡介
1、 目的 體外擴(kuò)增培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)。定向誘導(dǎo)MSCs為類Schwann細(xì)胞。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法使MSCs轉(zhuǎn)染增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因(EGFP)并穩(wěn)定表達(dá),觀測轉(zhuǎn)染后熒光表達(dá)強(qiáng)度及時間,轉(zhuǎn)染前后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性變化,及轉(zhuǎn)染對MSCs向類Schwann細(xì)胞誘導(dǎo)分化的影響。探討MSCs作為組織工程人工神經(jīng)種子細(xì)胞及利用EGFP作為體內(nèi)試驗(yàn)示蹤劑的可行性。
方法 密度梯度離心聯(lián)合貼壁篩選法分離擴(kuò)增培養(yǎng)兔骨髓
2、間充質(zhì)干細(xì)胞。采用β-巰基乙醇、全反視黃酸、福斯克林、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、重組人血小板衍生生長因子等依次誘導(dǎo)MSCs向類Schwann細(xì)胞定向分化,S100免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定。
同時用pLEGFP-N1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染PT67包裝細(xì)胞,提取病毒上清液后感染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,G418篩選及單克隆培養(yǎng)得到穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白的MSCs細(xì)胞(EGFP-MSCs)。觀察測定轉(zhuǎn)染前后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生長曲線,細(xì)胞活性和貼壁
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