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1、目的重組慢病毒介導(dǎo)TGF-β3/BMP-2聯(lián)合基因轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)其軟骨細(xì)胞分化,并比較其與TGF-β3單基因轉(zhuǎn)染誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞分化的效率.
方法全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)于細(xì)胞,CCK-8法繪制細(xì)胞生長曲線,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面抗原,培養(yǎng)后通過重組慢病毒分別轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照(N組)、TGF-β3單基因(T組)、TGF-β3/BMP-2聯(lián)合基因(TB組),轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)14天,熒光顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài),RT-PC
2、R、Westernblot分別檢測(cè)SOX-9、蛋白多糖、Ⅱ型膠原在基因水平與蛋白水平的表達(dá)量,甲苯胺藍(lán)染色與Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)。
結(jié)果流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)造血干細(xì)胞標(biāo)志物(CD34,2.07%)、白細(xì)胞表面抗原(HLA-DR,1.73%)均為陰性,透明質(zhì)酸受體(CD44,82.79%)為陽性,熒光顯微鏡觀察誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)多為多角形、方形或者類圓盤狀,RT-PCR、Western blot結(jié)果均示T組、TB組SOX
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