2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、前言:
   腦缺血即腦的短暫性血液供應不足,是一種急性的神經(jīng)損傷,是人類三大死亡原因之一。血管性癡呆(vascular dementia, VD)是由各種腦血管疾病導致的獲得性、持續(xù)性認知障礙綜合征。目前認為,大腦反復缺血再灌注是造成VD的主要原因之一。腦缺血可造成海馬CA1區(qū)遲發(fā)性神經(jīng)元壞死,從而導致學習記憶及空間定向等一系列行為障礙。沙鼠雙側頸動脈閉塞全腦腦缺血模型與人類的頸動脈閉塞很相似,是研究人類腦缺血的理想動物模型。

2、
   鹽酸多奈哌齊是第二代治療阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)的膽堿酯酶抑制劑,具有較強的乙酰膽堿酯酶抑制作用,能夠增加動物大腦乙酰膽堿含量,具有改善學習記憶障礙、選擇性強、作用時間長、無肝臟毒性等特點,其抑制作用是可逆的、非競爭性的,通過抑制AchE,能夠使直接參與神經(jīng)傳遞的突觸間隙的Ach含量增加,是應用于AD的輕、中度對癥治療藥。越來越多的證據(jù)表明,血管性癡呆患者有著與AD患者類似的膽堿能物

3、質(zhì)缺乏,因而膽堿能藥物(膽堿前體和膽堿酯酶抑制劑)也逐漸用于VD臨床治療,以改善血管性癡呆患者的認知功能。
   本研究通過Morris水迷宮實驗比較各組沙鼠的學習記憶能力,以及比較Ca2+-CaMK-CREB信號轉導通路中p-CaMKⅡ和p-CREB磷酸化蛋白水平的變化和海馬CA1區(qū)錐體細胞數(shù)的變化,為闡明鹽酸多奈哌齊對沙鼠腦缺血保護機制提供理論依據(jù)。
   材料與方法:
   1、動物、試劑與儀器
  

4、 雄性沙鼠,Bradford法測定蛋白濃度試劑盒(普利萊基因技術有限公司),彩色預染蛋白質(zhì)分子量標準(碧云天生物技術公司),DYY-5型穩(wěn)流穩(wěn)壓電泳儀電泳儀(北京六一儀器),Hoefer miniVE垂直電泳,低溫高速離心機(Centrifuge5810R,德國Eppendorf),蘇木素染液和伊紅染液(南京建成生物工程研究所),LeicaCM1900冰凍切片機,OLYMPUS BX51等。
   2、沙鼠腦缺血模型制備及給藥

5、
   36只雄沙鼠隨機分為假手術組、缺血組、缺血治療組,每組各12只,乙醚麻醉,頸部正中切口,分離兩側頸總動脈,無創(chuàng)傷微血管夾夾閉雙側頸總動脈,阻斷血流10min后再灌注,消毒,縫合創(chuàng)口,放回原條件下飼養(yǎng)。假手術組除不夾閉頸總動脈外,其余操作同上。缺血治療組從手術后當天連續(xù)灌胃給藥(5mg/kg/d)三周,假手術組、缺血組從手術后當天連續(xù)灌胃給相同體積的生理鹽水三周。
   3、神經(jīng)學評價
   手術24h后觀

6、察各組沙鼠的神經(jīng)癥狀,按五個等級評分:0,無癥狀;1,背部弓起;2,強直性癲癇發(fā)作;3,上瞼下垂;4,無意識。評價后分值越高,神經(jīng)損傷越嚴重。
   4、Morris水迷宮實驗測試各組沙鼠的學習記憶能力
   Morris水迷宮行為學測試各組沙鼠的學習記憶能力,訓練四天后,記錄其每天的平均逃避潛伏期(四天)和最后一天的90s內(nèi)的穿臺次數(shù)。
   5、HE染色觀察各組沙鼠的海馬CA1區(qū)
   HE染色觀察各

7、組沙鼠的腦內(nèi)海馬CA1區(qū)病理變化。
   6、Western blotting方法檢測p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白表達
   提取各組沙鼠腦海馬組織中p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白,考馬斯亮藍法蛋白定量,經(jīng)10%SDS-PAGE凝膠電泳后將蛋白轉印至PVDF膜上,一、二抗孵育,ECL化學發(fā)光法顯色。
   7、統(tǒng)計學分析
   結合圖像采集分析系統(tǒng),所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差表示,應用SPSS11.0統(tǒng)

8、計軟件,除水迷宮的潛伏期數(shù)據(jù)用重復測量數(shù)據(jù)的方差分析,其他數(shù)據(jù)用單因素方差分析進行組間比較,P<0.05為有統(tǒng)計學意義,P<0.01為有顯著統(tǒng)計學意義。
   實驗結果:
   1、神經(jīng)學評價結果顯示缺血組和缺血治療組的分值明顯高于假手術組(P<0.01),而缺血組與缺血治療組無差異(P>0.05)。
   2、Morris水迷宮結果顯示缺血組每天的平均潛伏期較假手術組的延長(P<0.01),而缺血組與缺血治療組

9、之間比較無差異(P>0.05)。最后一天的穿臺實驗結果顯示缺血組穿臺次數(shù)明顯少于假手術組(P<0.05),缺血治療組的穿臺次數(shù)明顯多于缺血組,而缺血治療組與假手術組無差異(P>0.05)。
   3、HE染色結果顯示假手術組海馬CA1區(qū)錐體細胞排列整齊緊密,缺血組失去正常結構,錐體細胞層次極其紊亂有空泡樣變,錐體細胞減少,缺血治療組錐體細胞排列較緊密,未見空泡樣變,錐體細胞較缺血組有所增加(P<0.05)。
   4、W

10、estern blotting結果顯示缺血組沙鼠腦海馬組織中p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白的表達較假手術組和治療組減少(P<0.05),而假手術組與缺血治療組比較無差異(P>0.05)。
   結論:
   1、沙鼠腦缺血再灌注24h后能引起神經(jīng)損傷,而鹽酸多奈哌齊不能快速改善神經(jīng)損傷。
   2、沙鼠腦缺血組海馬組織中的p-CaMKⅡ和p-CREB蛋白水平的表達較假手術組減少。
   3、缺血治療組海

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