腦缺血再灌注損傷后新生神經(jīng)元遷移的時(shí)空變化規(guī)律和機(jī)制的研究.pdf

1、目的:Reelin在大腦發(fā)育階段是新生神經(jīng)元的遷移信號(hào),reelin突變的小鼠表現(xiàn)出reeler表型,這種reeler小鼠的特征是大腦皮層缺乏分層結(jié)構(gòu),在成年大腦中reelin持續(xù)表達(dá),有實(shí)驗(yàn)證明reelin基因突變的reeler成年小鼠在腦缺血損傷后新生神經(jīng)元在齒狀回和喙側(cè)遷移流的數(shù)量和野生型小鼠相比大幅減少。這說明不僅在神經(jīng)元的發(fā)育階段,在成年大腦中reelin依舊對(duì)神經(jīng)元的遷移有影響。本文重點(diǎn)研究大腦缺血再灌注損傷后,reelin

2、對(duì)SVZ區(qū)新生神經(jīng)元時(shí)空變化的調(diào)節(jié)。
　　方法:大鼠MCAO(大腦中動(dòng)脈栓塞)再灌注模型,分別在腦缺血60分鐘后再灌注24h,72h,7d后取材,采用熒光免疫組織化學(xué)的方法觀察SVZ(室管膜下區(qū))分化中及遷移中的神經(jīng)元表達(dá)在上述時(shí)間點(diǎn)的變化。側(cè)腦室給藥RAP(reelin受體的競爭性抑制劑)阻斷reelin-dab1信號(hào)通路后,采用westernblotting測定缺血區(qū)dab1表達(dá)量。熒光雙標(biāo)免疫組織化學(xué)鑒定遷移中的神經(jīng)元和da

3、b1是否共定位。采用熒光免疫組織化學(xué)的方法檢測給藥后SVZ區(qū)分化中及遷移中的神經(jīng)元表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.westernblotting結(jié)果:與對(duì)照組比,腦缺血再灌注損傷同時(shí)給藥RAP1d、3d、7d、后,磷酸化dab1的表達(dá)量有顯著降低(〈0.05)
　　2.免疫熒光結(jié)果:(1)在SVZ區(qū),對(duì)照組、1d、3d、7d、均可見分化中神經(jīng)元(ki67標(biāo)記)陽性細(xì)胞。和對(duì)照組相比,腦缺血再灌注損傷后分化中的神經(jīng)元(ki6

4、7標(biāo)記)顯著增加(p〈0.05),缺血再灌注1天后陽性細(xì)胞最多,缺血后3d、7d陽性細(xì)胞數(shù)量依次減少。(2)在SVZ區(qū),對(duì)照組、1d、3d、7d均可見遷移中神經(jīng)元(PSA-NCAM)陽性細(xì)胞,和對(duì)照組相比,缺血再灌注損傷后7d的神經(jīng)元顯著性增加無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。缺血后1d、3d、遷移中的神經(jīng)元數(shù)目顯著性增加(p〈0.05)。(3)SVZ區(qū),缺血側(cè)和未缺血側(cè)相比區(qū)分化中的神經(jīng)元顯著增加(p〈0.05)。(4)給藥RAP后和對(duì)照

5、組相比,SVZ區(qū)遷移中的神經(jīng)元陽性細(xì)胞數(shù)量均有顯著減少(p〈0.05)。而分化中神經(jīng)元表達(dá)量沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)在大腦皮層,對(duì)照組、1d、3d、7d、均可見分化中神經(jīng)元(ki67標(biāo)記)陽性細(xì)胞。和對(duì)照組相比,腦缺血再灌注損傷后分化中的神經(jīng)元(ki67標(biāo)記)顯著增加(p〈0.05),缺血再灌注1天后陽性細(xì)胞最多,缺血后3d、7d陽性細(xì)胞數(shù)量依次減少。(6)在大腦皮層,對(duì)照組、1d、3d、7d均可見遷移中神經(jīng)元(PSA-NCAM)陽性細(xì)胞

6、,和對(duì)照組相比,缺血后1d、3d、7d遷移中的神經(jīng)元數(shù)目顯著性增加(p〈0.05)。(7)在大腦皮層,缺血側(cè)和未缺血側(cè)相比區(qū)分化中的神經(jīng)元顯著增加(p〈0.05)。(8)給藥RAP后和對(duì)照組相比,大腦皮層區(qū)域遷移中和分化中的神經(jīng)元陽性細(xì)胞數(shù)量均有顯著減少(p〈0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.大鼠再灌注損傷后,分化中及遷移中神經(jīng)元均顯著增加,且缺血區(qū)和未缺血區(qū)相比分化中的神經(jīng)元顯著增加。
　　2.給藥RAP后磷酸化da