Emdogain、辛伐他汀及兩者聯(lián)合應(yīng)用對人牙周膜細胞增殖和分化能力的影響.pdf

1、目的 觀察Emdogain、辛伐他汀及兩者聯(lián)合應(yīng)用對人牙周膜絀胞增殖和分化能力的影響。 方法；1、牙周膜組織的獲得：12～25歲因正崎治療需要拔除的恒牙，無全身疾病，實驗所需牙齒無齲病、牙周病、根尖周病等，嚴(yán)格消毒后將拔出的牙齒放入無芮的PBS溶液中，2小時內(nèi)刮取牙周膜組織培養(yǎng)牙周膜細胞。 2、人牙周膜細胞培養(yǎng)：人牙周膜細胞在含15％小牛血清的DMEM培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)，細胞接近融合成單層時，0.25％胰蛋白酶常規(guī)

2、消化，在倒置相差顯微鏡下觀察細胞分離、胞質(zhì)同縮，70％細胞脫壁后，終止消化，收集消化所得的細胞待用。本實驗所采用均為第4至第6代細胞。 3、人牙周膜細胞鑒定： a) 倒置相差顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察b) 礦化結(jié)節(jié)染色(茜素紅染色法)c) 免疫組化鑒定4、觀察不同濃度的Emdogain (200 mg/L、100 mg/L、50 mg/L、25mg/L )對人牙周膜細胞增殖和分化能力的影響： a) 四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)

3、比色法(MTT法)測定細胞增殖b) PNPP偶氮法檢測細胞的堿性磷酸酶活性c) Ⅰ型膠原檢測(羥脯氨酸含量測定)5、觀察不同濃度的辛伐他汀(0.125μmol/L、0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L)對人牙周膜細胞增殖和分化能力的影響： a) MTT法測定細胞增殖b) PNPP偶氮法檢測細胞的堿性磷酸酶活性c) Ⅰ型膠原柃測(羥脯氨酸含量測定)6、觀察濃度0.125μmol/L的辛伐他汀和濃度50 mg

4、/LEmdogain聯(lián)合作用對人牙周膜細胞增殖和分化能力的影響： a) MTT法測定細胞增殖b) PNPP偶氮法檢測細胞的堿性磷酸酶活性c) Ⅰ型膠原檢測 (羥脯氨酸含量測定)結(jié)果1、本實驗所培養(yǎng)細胞形態(tài)正常，狀態(tài)良好，性狀穩(wěn)定。此外，免疫組化染色角蛋白染色陰性，波形絲蛋白染色陽性，證明細胞足來源于外胚問充質(zhì)的牙周膜細胞，可用于后續(xù)實驗。 2、不同濃度的Emdogain(200 mg/L、100 mg/L、50 mg/L

5、、25mg/L )對人牙周膜細胞增殖和分化能力的影響： a)細胞增殖能力測定： 與對照組比較，25 mg/L、50 mg/L、100mg/L濃度Emdogain均可促進人牙周膜細胞增殖，對照組與實驗組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但實驗組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，且本實驗數(shù)據(jù)顯示50 mg/L作用較強。 b)細胞堿性磷酸酶活性測定： 與對照組比較，25 mg/L、50 mg/L、100mg/L 濃

6、度Emdogain可增加人牙周膜細胞的堿性磷酸酶活性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但組問比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，且本實驗數(shù)據(jù)顯示50mg/L濃度作用較強，而200mg/L濃度組在實驗期間不能提高人牙周膜細胞的堿性磷酸酶的活性。 c)Ⅰ型膠原檢測： 25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200mg/L4 個濃度Emdogain可增強人牙周膜細胞形成Ⅰ型膠原的能力(P<0.05)，且本實驗數(shù)據(jù)顯示50mg/L

7、 濃度作用較強。 3、不同濃度的辛伐他汀(0125μmol/L、0.25μmol/L、0.5μmol/L、1.0μmol/L)對人牙周膜細胞增殖和分化能力的影響： a)細胞增殖能力測定： 與對照組比較，各濃度紺辛伐他汀抑制人牙周膜細胞增殖，對照紺與實驗組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 b)細胞堿性磷酸酶活性測定： 與對照組比較，0.125μmol/l、0.25μmol/L、0.5μmol/

8、L 濃度辛伐他汀可增加人牙周膜細胞的堿性磷酸酶活性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但組問比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，且本實驗數(shù)據(jù)顯示0.125μmol/l濃度作削較強。 c) Ⅰ型膠原檢測： 0125μmol/L、0.25μmol/L、0.5μmol/L、10μmol/L 4 個濃度梯度辛伐他汀可增強人牙周膜細胞形成1型膠原的能力，但組問比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，且本實驗數(shù)據(jù)顯示0.125μmol/L濃度作用較強。 4

9、、觀察濃度0.125μmol/L的辛伐他汀和濃度 50mg/LEmdogain聯(lián)合作用對人牙周膜細胞增殖和分化能力的影響： a)細胞增殖能力測定： 二者聯(lián)合對人牙周膜細胞的增殖作用不明顯。 b)細胞堿性磷酸酶活性測定： 對照組與實驗組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，二者聯(lián)合對人牙周膜細胞的堿性磷酸酶活性有促進作用。 c)Ⅰ型膠原檢測： 對照組與實驗組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05

10、)，二者聯(lián)合對人牙劇膜細胞合成Ⅰ型膠原能力有促進作用。 結(jié)論 1、Emdogain可促進人牙周膜細胞增殖、堿性磷酸酶活性、合成Ⅰ型膠原能力增強； 2、辛伐他汀抑制人牙周膜細胞的增殖，但可促進其堿性磷酸酶活性和合成Ⅰ型膠原能力的增強： 3、兩者聯(lián)合應(yīng)用對細胞的增殖影響甚微，可促進細胞的堿性磷酸酶活性和合成Ⅰ型膠原的能力： 4、這為二者聯(lián)合應(yīng)用于心血管病、糖尿病患者的牙周病治療提供了一定的參考價殖，但