趨化因子SDF-1對人牙周膜干細胞增殖、遷移及分化的影響.pdf

1、目的：
　　 趨化因子SDF-1因能夠募集間充質干細胞(MSCs)、調控其增殖和分化，而在組織再生中發(fā)揮著重要作用。然而，它對人牙周膜干細胞(PDLSCs)的作用仍然不清楚。從人牙周韌帶組織中分離的PDLSCs，屬于成體間充質干細胞，在適當的培養(yǎng)條件下能分化為成牙骨質樣細胞、成骨細胞、脂肪細胞和膠原形成細胞，并且在動物牙周缺損模型中能夠再生成牙骨質/牙周韌帶樣結構。因此PDLSCs被認為是牙周組織再生的種子細胞并被用于以干細胞為

2、基礎的牙周組織再生工程中。人PDLSCs上趨化因子受體的表達、趨化因子對PDLSCs所起的趨化效應以及其在組織修復過程的后續(xù)效應可能是牙周組織再生中一個至關重要的過程。本研究的目的是探討趨化因子SDF-1受體CXCR4的在人PDLSCs上的表達及SDF-1對人PDLSCs生長活性、增殖、遷移與分化潛能的影響。
　　 方法：
　　 利用有限稀釋法從因正畸需要而拔除的健康前磨牙中分離、培養(yǎng)人PDLSCs。利用免疫細胞化學染色

3、的方法檢測波形絲蛋白和角蛋白及間充質干細胞表面標志STRO-1在PDLSCs上的表達。利用實時定量PCR及免疫細胞化學染色的方法檢測趨化因子SDF-1受體CXCR4在PDLSCs上的表達。利用MTT檢測方法及BrdU摻入法檢測SDF-1對PDLSCs生長活性及增殖狀態(tài)的影響。利用實時定量PCR的方法檢測SDF-1對PDLSCs分化相關因子Ⅰ型膠原蛋白(ColⅠ)和堿性磷酸酶(ALP)表達的影響。利用24孔的Transwell細胞培養(yǎng)室來

4、檢測SDF-1對PDLSCs的趨化效應。所有數據均使用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學單因素方差分析。P值小于0.05被認為具有統(tǒng)計學意義。
　　 結果：
　　 免疫細胞化學檢測證實人PDLSCs廣譜角蛋白陰性表達、波形絲蛋白陽性表達，且間充質干細胞標志STRO-1呈陽性表達。實時定量PCR分析證實人PDLSCs在mRNA水平上表達趨化因子受體CXCR4；定性免疫細胞化學檢測顯示人PDLSCs在蛋白水平上表達受體CXCR

5、4。與單獨使用培養(yǎng)基比較，SDF-1增強了人PDLSCs的生長活性與增殖狀態(tài)(P＜0.05)。實時定量PCR表明，SDF-1能夠顯著增加ColⅠ的表達水平(P＜0.01)，對ALP的表達水平無明顯影響（P＞0.05）。與空白對照組相比，在100ng/ml與400ng/ml之間，趨化因子SDF-1能夠明顯促進PDLSCs的遷移(P＜0.05)，最大的促遷移濃度是200ng/ml。使用CXCR4中和抗體處理后，PDLSCs的增殖及遷移效應明