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文檔簡介
1、目的:
氟是一種在人體成長發(fā)育過程中必需的微量元素。但長期通過飲食攝入過量的氟可引起硬組織的慢性病變,主要表現(xiàn)為氟斑牙和氟骨癥。歷年來有大量的關(guān)于氟與硬組織的研究,其關(guān)注點較多地集中在氟中毒所致病變的發(fā)生、發(fā)展機制方面。多數(shù)文獻均證實氟能夠增強成骨細胞和成纖維細胞的增殖及礦化能力。而目前在對如何促進牙周組織再生的組織工程技術(shù)研究中,較少關(guān)注氟元素的利用。本研究將不同濃度的氟化鈉(NaF)添加入體外培養(yǎng)的人牙周膜細胞(human
2、 periodontal ligament cells,hPDLCs)中,觀察其對hPDLCs增殖及礦化能力的影響,為臨床治療過程中將氟添加入牙周藥物來促進牙槽骨恢復(fù)提供一定的基礎(chǔ)研究依據(jù)。
方法:
從門診上收集因正畸等治療需求而拔除的健康前磨牙、第三磨牙,從根中1/3刮取的牙周膜組織中分離、培養(yǎng)并鑒定hPDLCs;通過細胞活力檢測試劑盒(cell-counting kit-8,CCK-8)測定不同濃度的NaF對hP
3、DLCs增殖能力的影響,并選取三組無毒害作用的濃度用于礦化能力的觀察實驗;使用第4~6代hPDLCs,配制NaF終濃度為1×10-5、5×10-4和1×10-3 mol/L的礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)基,以無氟的礦化誘導(dǎo)組為對照,通過堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性檢測、實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chainreaction,qRT-PCR)和茜素紅染色及
4、鈣結(jié)節(jié)定量檢測法測定不同濃度NaF對hPDLCs礦化能力的影響。本研究采用SPSS20.0軟件對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)的單因素方差分析,數(shù)據(jù)均用Mean±SD表示,P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
結(jié)果:
1、成功從牙周膜組織中分離培養(yǎng)出hPDLCs,且細胞形態(tài)正常,狀態(tài)良好;免疫細胞化學(xué)鑒定表明細胞成分較單一,細胞可靠,可用于后續(xù)試驗。
2、細胞活力檢測結(jié)果表明,NaF終濃度在5×10-5、1×10-4、5×
5、10-4 mol/L時均能提高hPDLCs的增殖能力,且5×10-4 mol/L的濃度組可以觀察到最佳的促進細胞增殖能力的效應(yīng)(P<0.05)。從各濃度中篩選出三組對細胞無毒害作用的終濃度,用于礦化實驗,以不含氟的細胞組為對照。
3、堿性磷酸酶活性檢測結(jié)果表明,添加NaF孵育14 d后,與對照組相比,NaF終濃度為1×10-5 mol/L實驗組的堿性磷酸酶染色陽性面積最大(P<0.05),由此可知1×10-5 mol/L的Na
6、F能顯著提高ALP活性;qRT-PCR的數(shù)據(jù)則根據(jù)各實驗分組的時間監(jiān)測點、指標(biāo)等因素表現(xiàn)出較大的變化,未能觀察到較為一致的劑量-效應(yīng)關(guān)系;茜素紅染色及鈣結(jié)節(jié)定量檢測法結(jié)果表明,添加不同濃度NaF培養(yǎng)細胞28 d后,1×10-5 mol/L的NaF終濃度添加組中可觀察到較多的礦化結(jié)節(jié)數(shù)量,且萃取染料定量檢測結(jié)果也提示1×10-5 mol/L的NaF實驗組與對照組相比鈣含量顯著增多(P<0.05)。
結(jié)論:
本實驗證實當(dāng)
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