急性小腸梗阻時血清DAO、MDA及腸壁組織學變化的研究.pdf

1、目的： 腸梗阻是外科常見的急腹癥之一。腸梗阻可導致復雜多樣的病理生理變化，近年來對腸梗阻后的全身病理生理變化的研究不斷提高，包括腸蠕動增加，腸腔積氣積液，腸壁充血水腫，缺血缺氧、感染中毒等諸多方面，而且其也可引起腸管本身解剖與功能上的改變。隨著診療水平不斷提高，它的確診率和死亡率都有很大程度升高和降低，但臨床上對于腸梗阻特別是小兒腸梗阻如何及時、準確地做出診斷及制定出相應的治療措施仍存在分歧，仍是臨床上一個需要解決的課題。

2、 急性腸梗阻時病情的演變與腸壁受損程度密切相關(guān)，準確判斷梗阻腸段的受損程度對急性腸梗阻的治療和預后至關(guān)重要。本實驗擬通過同時檢測幼齡大鼠急性腸梗阻時不同時相血清中二胺氧化酶(DAO)、丙二醛(MDA)活性的改變，并結(jié)合酶組織化學和超微電鏡技術(shù)觀察腸壁受損時病理形態(tài)學變化，了解二者之間的關(guān)系，為臨床上急性小兒腸梗阻的診斷及手術(shù)時機的選擇提供一定的幫助。 材料和方法： 實驗選用幼齡Wistar大鼠49只，體重(95±12)

3、g，雌雄不分，由河北醫(yī)科大學動物中心提供。按隨機原則分為A、B、C、D、E、F、G共7組，每組7只。A組為對照組，余為實驗組。實驗前禁食過夜，自由飲水。用3％戊巴比妥鈉腹腔注射(30mg/kg)，麻醉生效后，固定于鼠臺上，剪毛消毒。于下腹部正中切口入腹，B-G組均距回盲部3cm處粗絲線結(jié)扎小腸腸管，使腸內(nèi)容物不能通過，不結(jié)扎腸系膜血管，關(guān)閉腹腔。A組除不結(jié)扎腸管外，其余步驟相同。對A-G組實驗動物分別于手術(shù)后0h、3h、6h、12h、2

4、4h、48h、72h，取距回盲部4cm近端小腸一段(寬約1.0cm)，均分成兩段。4℃生理鹽水漂洗，一段包埋于OCT中，行連續(xù)冰凍切片，厚度為4um，分別進行酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、還原型輔酶Ⅰ四唑氮還原酶染色鏡檢。另一段修成1mm<'3>大小的組織塊，于4％戊二醛4℃固定，超薄切片，透射電鏡觀察，并攝片記錄。同時斷頭取血4ml，置無菌試管中，分離血清，進行DAO、MDA活性的定量測定。結(jié)果以x±s表示，對所得數(shù)據(jù)進行t檢驗處理，檢驗標

5、準采用P<0.05有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果： 1 動物的一般情況正常幼鼠反應靈敏，性情活潑，腸管顏色鮮艷，有光澤，不擴張。隨著梗阻時間的延長，幼鼠暴躁，易激惹，實驗組術(shù)后24h梗阻近端腸管擴張充血，彈性下降。48h后幼鼠精神萎靡，1 只死亡，近端腸管極度擴張，彈性消失，呈暗紫色，部分壞死。72h后幼鼠精神呆滯，觸之無反應，4只死亡，近端腸管大部分壞死。 2 血清DAO活性測定結(jié)果：A組幼鼠血清DA0為0.7393±0

6、.2978U/ml。與A比較各組均有不同程度的升高，以DEF組升高較顯著，在統(tǒng)計學上有顯著性差異(P<0.05)，BCG組雖均有升高，但與A組無顯著性差異。 3 血清MDA活性測定結(jié)果：A組幼鼠血清MDA為3.46±0.66umol/l。與A比較各組均有不同程度的升高，DEFG組升高較顯著，在統(tǒng)計學上有顯著性差異(P<0.05)。BC組雖均有升高，但與A組無顯著性差異。 4 腸壁病理學 觀察結(jié)果： 4．1 酸性磷

7、酸酶組化染色觀察：ACP是溶酶體標志酶，ACP酶活性處出現(xiàn)紅色無定形的沉淀。A組定位于細胞胞漿溶酶體內(nèi)；B組紅色均勻規(guī)則，紅染區(qū)基本連續(xù)；C組絨毛損傷缺損較大，紅色均勻，紅染區(qū)不連續(xù)、不規(guī)則；D組絨毛結(jié)構(gòu)不完整、水腫破壞，ACP溢出呈團塊狀；E組ACP團塊狀增多；F組病變加重，細胞水腫，中間為平滑肌，有團塊結(jié)構(gòu)，薄厚不一；G組溶體不均勻，肌層消失。 4．2 堿性磷酸酶組化染色觀察：AKP是細胞膜標志酶，AKP酶活性處為深藍色。A

8、組定位于絨毛吸收細胞胞漿基底部靠近核；B組基膜不完整；C組基膜不完整缺失、斷裂；D組水腫明顯，平滑肌部分缺失；E組絨毛高度水腫，部分萎縮，平滑肌破壞，粘膜下增寬，細胞壞死、腫脹，酶釋放，酶大量存在于絨毛間質(zhì)；F組酶已完全進入間質(zhì)，中間絨毛無酶；G組酶已完全脫離絨毛基膜和腺體。 4．3 還原型輔酶I四唑氮還原酶染色觀察：NADH-TR位于線粒體中，酶活性處呈藍紫色。A組定位于胞漿內(nèi)，細胞邊緣較清楚，藍紫色；B組絨毛變寬水腫，已出現(xiàn)

9、在間質(zhì)；C組間質(zhì)內(nèi)團塊出現(xiàn)，上皮已不完整、缺損；D組絨毛腫脹變寬、不連續(xù)；E組酶變淡，線粒體數(shù)量減少；F組絨毛結(jié)構(gòu)破壞更重，顏色變淺(不可逆)；G組高度水腫，著色極淡。 4．4 超微結(jié)構(gòu)觀察：A組腸粘膜上皮示單層柱狀上皮，微絨毛結(jié)構(gòu)完整，排列緊密整齊，粗細長短均一、無腫脹。細胞之間緊密連接完整，細胞器無明顯損傷。杯狀細胞分泌旺盛，分泌小泡之間隔膜清晰完整，無融合現(xiàn)象。B組微絨毛正常，細胞連接極其輕微變化。C組吸收細胞微絨毛接近正

10、常，排列整齊，部分中間連接腔擴大，部分中間連接有融合現(xiàn)象，線粒體輕度改變。杯狀細胞細胞器變化極輕微。D組吸收細胞微絨毛接近正常，中間連接稍擴大，線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度變化，杯狀細胞細胞器輕度變化。E組吸收細胞微絨毛數(shù)量減少，線粒體水腫，嵴數(shù)量稍減少，排列稍紊亂，部分嵴消失，膜完整，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)部分脫顆粒。間質(zhì)毛細血管周圍明顯水腫，內(nèi)含纖維細胞。F組吸收細胞表面微絨毛減少，核上區(qū)的細胞質(zhì)內(nèi)線粒體水腫，嵴數(shù)量減少，排列紊亂，部分嵴和膜融合消失

11、。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張呈池狀，有脫顆粒現(xiàn)象。杯狀細胞核上細胞質(zhì)內(nèi)較多的分泌顆粒。G組微絨毛稀疏，排列紊亂。緊密連接部分融合，中間連接部分融合消失、斷裂，中間連接腔擴大，橋粒結(jié)構(gòu)正常。線粒體水腫，大部分嵴和膜融合消失。粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)：膜旁核糖體部分融合，部分脫落消失。杯狀細胞核上胞質(zhì)內(nèi)的線粒體水腫，大部分嵴和膜融合或消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆?，F(xiàn)象。 結(jié)論： 本實驗結(jié)果揭示了幼鼠急性完全性腸梗阻時血清丙二醛、二胺氧化酶的活性改變及腸壁受損

12、的形態(tài)學的變化的關(guān)系。隨著梗阻時間的延長，腸壁受損加重，細胞受損酶釋放，血清DAO、MDA濃度逐漸升高，24h后DAO、MDA、濃度升高不明顯，48h后DAO濃度下降，可能與24小時后梗阻近端大量腸壁受損嚴重，腸粘膜已大部壞死，發(fā)生不可逆變化有關(guān)，根據(jù)血清DAO、MDA濃度變化可以推測腸壁的受損程度。應該在腸壁發(fā)生不可逆變化之前必須手術(shù)探查解除梗阻，所以小兒急性完全性腸梗阻在經(jīng)積極非手術(shù)治療24h～48h內(nèi)病情無好轉(zhuǎn)，即使病情無加重，亦