家禽土霉素蓄積性毒性試驗(yàn)與HPLC殘留分析研究.pdf

1、土霉素(Oxytetracycline)是1950年發(fā)現(xiàn)的廣譜抗菌素。對(duì)革蘭氏陽性菌、陰性菌、螺旋體、衣原體等均有抑制作用，國(guó)內(nèi)外獸醫(yī)臨床上廣泛用作豬、牛、雞、鴨等動(dòng)物的抗菌藥，也常添加入飼料預(yù)防疾病的發(fā)生。山于長(zhǎng)期廣泛應(yīng)用，細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，使用劑量不斷提高。又由于大劑量濫用，使畜禽組織中殘留量不斷增高，被人們食用后帶來極大危害。國(guó)內(nèi)外早已報(bào)道可引起“二重感染”，骨髂牙齒變黃，胎兒死亡。長(zhǎng)期毒害還可造成致畸、致癌。 國(guó)內(nèi)外對(duì)土霉

2、素殘留的研究，多數(shù)停留在單一的分析方法，或“二重感染”、“四環(huán)素黃牙”等臨床病癥上，而土霉素對(duì)人畜毒性和快速檢測(cè)的系統(tǒng)研究報(bào)道甚少。本試驗(yàn)結(jié)合我攻讀的碩士方向“動(dòng)物性食品安全與檢驗(yàn)”，設(shè)計(jì)以4周齡雞作1個(gè)月土霉素蓄積性毒性試驗(yàn)，系統(tǒng)研究試驗(yàn)動(dòng)物口服土霉素不同劑量后所表現(xiàn)的生產(chǎn)性能、生前癥狀，剖檢變化，組織學(xué)切片、血液生化指標(biāo)和用現(xiàn)代最先進(jìn)的儀器高效液相色譜儀(HPLC)檢測(cè)組織中土霉素殘留。然后再以2周齡肉鴨投藥1個(gè)月作重復(fù)試驗(yàn)，對(duì)土霉

3、素的毒性、毒性機(jī)理、靶器官進(jìn)行探索，并對(duì)土霉素的吸收、分布、排泄、降解作進(jìn)一步研究，為生產(chǎn)上及時(shí)檢出土霉素殘留超標(biāo)的畜禽產(chǎn)品和早期防止土霉素殘留超標(biāo)提供科學(xué)依據(jù)。 雞蓄積性毒性試驗(yàn)結(jié)果：從本地雞場(chǎng)購(gòu)回未接觸過任何藥物的2周齡雜交雞100只，飼喂自己加工未添加任何藥物的配合飼料。經(jīng)預(yù)防接種，喂養(yǎng)2周產(chǎn)生抗體后，又從中選擇20只隨機(jī)分為四個(gè)組：0組(對(duì)照組)、試驗(yàn)Ⅰ組(低劑量)、Ⅱ組(中劑量)和Ⅲ組(高劑量)，每組5只。按照設(shè)計(jì)劑量

4、給每個(gè)組每只雞口服投藥12.5mg、25mg、50mg，以后隨體重增加每周增加1倍劑量。投藥后表現(xiàn)的變化：①生前癥狀：第4天Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組雞陸續(xù)出現(xiàn)精神差、食欲減退、嗜睡。第7天、8天第Ⅲ組雞接連死亡2只，第12天第Ⅱ組死亡1只，第14天Ⅰ組死亡一只。其他雞精神沉郁，食欲減半或廢絕，臥地不起，眼半閉或全閉，雞冠和面部蒼白，排稀便。②剖檢變化：及時(shí)剖檢自然死亡雞和投藥1個(gè)月宰殺試驗(yàn)雞，死雞肝臟嚴(yán)重腫大。為正常肝臟的1.5～2倍，肝邊緣鈍園，

5、顏色變黃褐色，有明顯出血點(diǎn)，易碎有油膩感。腎腫大1.2～1.5倍，紅褐色，有出血點(diǎn)，易碎。心臟稍腫大，心包積液。肌肉纖維水腫，骨骼略黃。其他試驗(yàn)雞呈相同性質(zhì)不同程度病理變化。③組縱切片檢查：以肝臟、腎臟的變性壞死為主要特征，肝小葉細(xì)胞排列十分紊亂，細(xì)胞內(nèi)充滿大小空泡使肝組織呈網(wǎng)狀樣變，細(xì)胞間有紅血球浸潤(rùn)。肝細(xì)胞核濃縮、碎裂和消失，中央靜脈淤血。腎小管細(xì)胞明顯壞死，大量脫落于管腔中，腎小球細(xì)胞腫大。④血液生化指標(biāo)：反應(yīng)肝臟、腎臟和心臟損害

6、的指標(biāo)都增高。肝功指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ACT)為5～7IU/L(0組為3IU/L)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)為232～249IU/L(0組為229IU/L)、乳酸脫氫酶(LDII)為693～885IU/L(0組為624IU/L)，堿性磷酸酶(SKP)為510～770IU/L(0組為470IU/L)。反應(yīng)腎臟損害指標(biāo)：血清肌酐(CREA)為116～139IU/L(0組為73IU/L)。反應(yīng)心臟損害的指標(biāo)：α-羥丁酸脫氫酶(HBDH)為788～10

7、66IU/L(0組為670IU/L)。檢測(cè)早期癌變生化指標(biāo)甲胎抗原(AFP)和癌胚抗原(CEA)均為陰性。⑤HPLC檢測(cè)雞組織中殘留：肌肉0組、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別為0、0.1、0.3、1.5、0.04(mg/kg)。雞肝臟：0組、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組分別為0、0.2、0.4、1.6、0.05(mg/kg)。說明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個(gè)組肌肉、肝臟的殘留量均超過NY5034-2001標(biāo)準(zhǔn)。第Ⅳ組(降解組)雞經(jīng)2周降解，殘留量已明顯低于NY5034-2

8、001值。從上述結(jié)果雞呈明顯藥物中毒表現(xiàn)，也反應(yīng)了土霉素的毒性特點(diǎn)。 鴨蓄積性毒性試驗(yàn)——土霉素殘留重復(fù)試驗(yàn)：為了驗(yàn)證雞蓄積性毒性試驗(yàn)各項(xiàng)結(jié)果的可靠性，選用2周齡天府肉鴨20只，完全按照雞試驗(yàn)方案分組，預(yù)防接種、飼養(yǎng)、口服土霉素，試驗(yàn)1個(gè)月。觀察肉鴨的生前癥狀，剖檢變化，組織學(xué)切片，血漿生化指標(biāo)和用HPLC檢測(cè)鴨組織中的土霉素殘留。 鴨試驗(yàn)結(jié)果表明，上述各項(xiàng)試驗(yàn)與雞蓄積性毒性試驗(yàn)完全重復(fù)。不過鴨生前癥狀比雞輕微，未發(fā)生死