卡介苗激活殺傷細(xì)胞誘導(dǎo)T24細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文卡介苗激活殺傷細(xì)胞誘導(dǎo)T24細(xì)胞凋亡的研究姓名：任黎剛申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：外科學(xué)（泌尿外科）指導(dǎo)教師：汪朔謝立平2002.3.1型!堅(jiān)盔蘭塑!：蘭絲堡=!!；：!=!!；塑莖——LAK和NK三組免疫細(xì)胞加至T24中，分別作用2h、4h、8h、12h后，輕輕洗去淋巴細(xì)胞，并直接在培養(yǎng)板中進(jìn)行Ao，EB雙熒光染色，倒置在熒光顯微鏡的觀(guān)察臺(tái)上，以360—440nm的藍(lán)紫光和紫外光激發(fā)波長(zhǎng)激發(fā)熒光，觀(guān)察、拍攝。進(jìn)一步的實(shí)

2、驗(yàn)以4h為效靶細(xì)胞作用時(shí)間，洗去淋巴細(xì)胞后，分別在0h、4h、12h時(shí)間段熒光染色觀(guān)察拍照。每組取3個(gè)復(fù)孔，重復(fù)兩次。照片沖印后在計(jì)算機(jī)輔助下計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞，得出凋亡指數(shù)并以一張200倍數(shù)照片的視野范圍作為一個(gè)單位視野，評(píng)價(jià)殘留貼壁細(xì)胞數(shù)。同時(shí)進(jìn)行蘇木素染色顯微鏡下觀(guān)察，并在掃描電鏡和透射電鏡下觀(guān)察確認(rèn)凋亡。所有結(jié)果以圖表顯示，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用spssl00軟件。結(jié)果：無(wú)論BAK、LAK還是NK細(xì)胞均可誘導(dǎo)凋亡的發(fā)生。AO／EB熒光染色及熒光

3、顯微鏡觀(guān)察發(fā)現(xiàn)：正常T24細(xì)胞梭形或多角形生長(zhǎng)，細(xì)胞異型性明顯，呈現(xiàn)為綠色或黃綠色，在細(xì)胞較疏時(shí)，凋亡細(xì)胞少，細(xì)胞生長(zhǎng)密集時(shí)凋亡增多，凋亡細(xì)胞細(xì)胞核呈現(xiàn)為橙紅色，胞漿為淡紅色，細(xì)胞外觀(guān)形態(tài)如?；虬櫩s。懸浮的T24腫瘤細(xì)胞和懸浮的淋巴細(xì)胞的熒光染色觀(guān)察見(jiàn)多量凋亡細(xì)胞。1、多個(gè)效靶細(xì)胞作用時(shí)間組。以AO／EB熒光染色及熒光顯微鏡觀(guān)察、拍照，評(píng)價(jià)凋亡。(1)LAK作用2h時(shí)殺傷能力已非常明顯，作用2h、4h、8h、12h時(shí)的平均凋亡指數(shù)分別為

4、：2113％、4002％、3509％、4643％；單位視野平均貼壁細(xì)胞數(shù)為：66、57、36、22。(2)BAK作用4h時(shí)才顯現(xiàn)一定的抗腫瘤活性，作用2h、4h、8h、12h時(shí)的平均凋亡指數(shù)分別為：773％、1067％、146％、1068％；單位視野平均貼壁細(xì)胞數(shù)為：176、137、131、126。(3)NK抗腫瘤作用弱，延長(zhǎng)作用時(shí)間并未增加抗腫瘤效果，作用2h、4h、8h、12h時(shí)的平均凋亡指數(shù)分別為：1133％、847％、727％、