卡介苗(BCG)激活的人外周血單個核細胞對HeLa細胞的殺傷作用研究.pdf

1、目的:初步探討卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG)對高危HPV感染疾病的治療作用，尋求BCG治療抗HPV病毒的證據。研究在細胞水平上BCG激活的人外周血單個核細胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）對HPV感染細胞的周期及凋亡的影響，并探討其對細胞中HPV-E7蛋白以及RB/E2F1通路的影響。
　　 方法:選擇6個健康志愿者，抽取新鮮的外周血，用細胞分離

2、液分離出單個核細胞(PBMC)，用卡介苗刺激PBMC5天作為BCG激活的殺傷細胞(BCG-activatedkiller cell,BAK)，未刺激的PBMC作為自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)。激活的人外周血單個核細胞與高危HPV18感染轉化的宮頸癌細胞系HeLa細胞在不同濃度比下共同培養(yǎng)。相互作用20小時后，用MTS法分別檢測激活的外周血單個核細胞和未激活的外周血單個核細胞的殺傷率;收集作用后的HeLa細

3、胞，用流式細胞術分別檢測細胞周期分布及凋亡情況;同時用實時熒光定量PCR和Western blot檢測HeLa細胞中E7基因以及RB/E2F1通路相關基因的轉錄和翻譯水平變化。
　　 結果:在效靶比（效應細胞/靶細胞，E/T）分別為40∶1、20∶1、10∶1情況下，卡介苗激活的殺傷細胞（BAK）對HeLa細胞的殺傷率分別為24.08％、14.74％、6.8％，而未激活的外周血單個核細胞作為自然殺傷細胞(NK)的殺傷率分別為17

4、.62％、10.78％、5.8％。在效靶比為40∶1和20∶1時BAK細胞的殺傷率大于NK細胞，兩者差別有顯著性意義(P＜0.05)。在20∶1效靶比相互作用下，收集HeLa細胞做周期及凋亡檢測顯示BAK組的凋亡率24.2％明顯高于NK組的凋亡率13.45％(P＜0.05)。BAK細胞或NK細胞與HeLa細胞作用后均可使HeLa細胞周期抑制在G1期;且兩組HeLa細胞與空白對照組正常HeLa細胞比較RB、E2F1均有顯著性交化，RB表達

5、升高而E2F1表達下降。然而兩組的抑制作用以及兩組之間RB、E2F1的轉錄與翻譯水平變化無明顯差異(P＞0.05)。然而，HPV-E7在轉錄水平各組間無差異(P＞0.05)，在蛋白表達量上BAK組和NK組比空白對照組稍有增加，但無顯著性差別(P＞0.05)。
　　 結論:在細胞水平上證明了用卡介苗激活的免疫細胞能夠殺傷高危HPV感染并整合的HeLa細胞，抑制細胞增殖并促進其凋亡，而這個殺傷過程可能與RB/E2F1這條通路改變密切