細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞抗腫瘤研究.pdf

1、隨著人群平均壽命的延長和環(huán)境污染物的蓄積，惡性腫瘤的疾病負荷有加重的趨勢，與此同時，腫瘤的常規(guī)治療方法日趨成熟，但也暴露出其缺陷和局限性，包括正常組織不可避免的損傷和第二原發(fā)腫瘤風(fēng)險的增加等等。因此，近三十年來，腫瘤的免疫治療，尤其是過繼免疫治療研究受到了廣泛的關(guān)注，也取得了相當?shù)某晒?細胞因子誘導(dǎo)的殺傷細胞(CIK細胞)是由淋巴因子激活的殺傷細胞(LAK細胞)發(fā)展而來的一種新的腫瘤過繼免疫治療方法，自上世紀90年代以來，各國

2、學(xué)者對其作用機制和臨床應(yīng)用進行了深入探索。與LAK細胞相比，ClK細胞具有殺傷活性強、不良反應(yīng)小等優(yōu)點，目前已經(jīng)在國內(nèi)外多個研究中心進入臨床試驗階段。 本項研究是經(jīng)過國家食品藥品監(jiān)督管理局的批準，對中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院研制的CIK細胞進行CIK細胞抗腫瘤Ⅰ期臨床試驗，研究自體來源CIK細胞擴增技術(shù)和抗腫瘤活性，探討CIK細胞臨床應(yīng)用的安全性以及其對于腫瘤患者體內(nèi)T細胞免疫功能的影響，同時初步論證CIK細胞對于B細胞非霍奇

3、金淋巴瘤的治療價值。 本項研究的第一、第二部分從21例惡性腫瘤患者(包括肝癌10例、白血病3例、淋巴瘤2例、腎癌2例、胃癌1例、肺癌2例、卵巢癌1例)采集外周血單個核細胞體外培養(yǎng)CIK細胞，培養(yǎng)第10天采樣測定CIK細胞擴增情況、效應(yīng)蛋白表達水平和體外殺傷活性，隨后將受試者按CIK細胞輸注劑量分為四個治療組觀察不良反應(yīng)，并測定輸注前后患者外周血淋巴細胞活化相關(guān)表面標志變化情況。我們從21例惡性腫瘤患者的外周血單個核細胞成功擴增了

4、CIK細胞，培養(yǎng)第10天采樣，細胞總數(shù)平均擴增12.8倍(6.3倍～22.8倍)，CD3<'+>CD56<'+>細胞數(shù)平均擴增544.6倍(131.0倍～1586.9倍)；細胞群體中18.59％(10.92％～30.16％)合成IFN-γ，26.26％(18.43％～35.08％)合成。TNF-α，82.74％(50.30％～93.30％)合成穿孔素，79.97％(55.79％～95.15％)合成顆粒酶B；在效靶比10：1的情況下，4小

5、時內(nèi)能夠殺傷72.95％(60.03％～81.08％)的K562細胞。21例惡性腫瘤患者中未出現(xiàn)導(dǎo)致研究中斷的嚴重不良事件，CIK細胞最大耐受劑量20.1×10<'9>，觀察到WHO 2級發(fā)熱5例，一過性白細胞減少2例，均能迅速恢復(fù)正常；CIK細胞輸注后，患者外周血淋巴細胞表面CD25、CD38、CD69表達均有明顯上調(diào)，P<0.001。 本項研究的第三部分從4例復(fù)發(fā)/難治性B細胞非霍奇金淋巴瘤患者采集外周血單個核細胞體外培養(yǎng)C

6、IK細胞，培養(yǎng)第10天采樣測定CIK細胞擴增情況和體外殺傷活性，受試者接受CIK細胞治療聯(lián)合全身化療，觀察不良反應(yīng)并評價腫瘤負荷消長，同時測定輸注前后患者外周血淋巴細胞活化相關(guān)表面標志和抑制T細胞亞群比率變化情況。我們同樣從4例復(fù)發(fā)/難治性B細胞非霍奇金淋巴瘤患者的外周血單個核細胞成功擴增了CIK細胞，培養(yǎng)第10天采樣，細胞總數(shù)平均擴增35.5倍(27.1倍～45.3倍)，CD3<'+>細胞數(shù)平均擴增46.8倍(30.0倍～65.8倍)

7、，CD3<'+>CD56<'+>細胞數(shù)平均擴增1001.0倍(669.4倍～1467.3倍)，在效靶比10：1的情況下，4小時內(nèi)能夠殺傷67.25％(59.30％～75.10％)的K562細胞；4例受試者共接受了11個療程的CIK細胞治療，平均每療程劑量(19.3±2.1)×10<'+>，最大耐受劑量21.3×10<'9>，其中7個療程為聯(lián)合全身化療，4個療程為單獨用藥，觀察到WHO 2級發(fā)熱2例3人次，未出現(xiàn)導(dǎo)致研究中斷的嚴重不良事件

8、，在7個療程聯(lián)合全身化療的受試者中，與既往治療時相比，加用CIK細胞后骨髓抑制的持續(xù)時間與嚴重程度沒有加重，也沒有發(fā)生嚴重并發(fā)癥，對常規(guī)全身化療無不良影響；CIK細胞治療2療程后，受試者外周血淋巴細胞CD69表達率平均增加122.90％(22.76％～349.86％)，CD4<'+>CD25<'+>細胞亞群平均降低25.78％(5.68％～72.37％)，2例受試者CD4/CD8比率有所改善，治療期間隨訪，4例受試者中1例部分反應(yīng)、2例