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文檔簡介
1、誘導(dǎo)性肝樣細(xì)胞(inducedhepatocyte-like,iHep)是通過模擬肝細(xì)胞的發(fā)育過程,在體外將非肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化形成的具有肝細(xì)胞形態(tài)和功能的一類細(xì)胞。誘導(dǎo)性肝樣細(xì)胞能夠表達(dá)肝細(xì)胞特異性基因,發(fā)揮肝細(xì)胞特異的功能,如:分泌白蛋白,吸收和排出吲哚青綠(ICG),合成尿素,儲存糖原等。直接分離的原代肝細(xì)胞很難在體外增殖培養(yǎng),因此從其他細(xì)胞轉(zhuǎn)化成可替代肝細(xì)胞的誘導(dǎo)性肝樣細(xì)胞的研究對于開展細(xì)胞分化調(diào)控、再生醫(yī)學(xué)、細(xì)胞發(fā)育等的基礎(chǔ)研究以
2、及肝臟疾病的細(xì)胞治療與藥物研究和開發(fā)等具有重要意義。
本研究以大鼠誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(inducedpluripotentstemcells,iPSCs)為起始細(xì)胞,采用了分階段逐步誘導(dǎo)的方法將其誘導(dǎo)分化成肝樣細(xì)胞。在誘導(dǎo)過程中,先將細(xì)胞由含activinA的培養(yǎng)基培養(yǎng)3天,使細(xì)胞向內(nèi)胚層分化;接著用含F(xiàn)GF4和BMP2的培養(yǎng)基培養(yǎng)4天,使已經(jīng)開始分化的細(xì)胞向肝系細(xì)胞特異性分化;再分別由含HGF和KGF培養(yǎng)基培養(yǎng)6天、含OS
3、M和DEX培養(yǎng)基培養(yǎng)8天,使分化的細(xì)胞進(jìn)一步擴(kuò)大增殖和分化,形成成熟的肝樣細(xì)胞。
對上述各個階段的細(xì)胞檢測,結(jié)果顯示,在activinA誘導(dǎo)3天,F(xiàn)GF4和BMP2誘導(dǎo)4天后,iPSCs形態(tài)發(fā)生明顯的變化,由邊界清晰且致密整齊的克隆形態(tài)向上皮樣細(xì)胞轉(zhuǎn)變,從mRNA水平檢測到有肝特異基因Alb、Afp、Ck18、G6p和Hnf4a的表達(dá)。其中,Afp和Ck18的表達(dá)水平較高,Alb、G6p和Hnf4a的表達(dá)水平較低。免疫熒光
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