質(zhì)子感知受體GPR4對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子基因的表達(dá)調(diào)控作用.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中，均有不同程度的炎癥反應(yīng)的發(fā)生，內(nèi)皮細(xì)胞含有并釋放促進(jìn)組織損傷的炎癥分子。在炎癥環(huán)境下，由低氧環(huán)境發(fā)生的無氧糖酵解導(dǎo)致乳酸的積累，進(jìn)而導(dǎo)致病變區(qū)域pH的降低，這預(yù)示著酸性環(huán)境對(duì)動(dòng)脈硬化的發(fā)生可能有重要的作用;溶血磷脂酰膽堿(LPC)是磷脂酰膽堿的衍生物，由磷脂酶A2(PLA2)催化磷脂酰膽堿(PC)的水解生成，LPC是氧化性低密度脂蛋白o(hù)x-LDL的主要成分，因此LPC在動(dòng)脈硬化部位是高濃度的。
　　研

2、究表明，內(nèi)皮細(xì)胞中GPR4是一類重要的雙配體受體，在酸性環(huán)境中有重要的作用，如促進(jìn)粘附分子表達(dá)，炎癥因子表達(dá)等。GPR4作為雙配體受體在內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥因子表達(dá)的調(diào)控作用的分子機(jī)理仍然不明。本研究首次闡述了質(zhì)子感知受體GPR4在內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子表達(dá)過程中的一種新現(xiàn)象，這為能更好的理解動(dòng)脈硬化的致病機(jī)理，為治療動(dòng)脈硬化也可能提供潛在靶點(diǎn)。
　　目的:研究質(zhì)子感知受體GPR4的活化對(duì)白細(xì)胞介素6(Interleukin-6，IL-6)

3、、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor, TNF-α)基因表達(dá)的調(diào)控作用及受體介導(dǎo)的信號(hào)通路，并探討在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用。
　　方法:構(gòu)建GPR4表達(dá)載體和shRNA-GPR4干擾載體，轉(zhuǎn)染HUVEC細(xì)胞;Real Time PCR法檢測(cè)HUVEC細(xì)胞中過表達(dá)GPR4基因及干擾GPR4基因后GPR4基因的表達(dá)。用酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞中IL-6和TNF-α的表達(dá);用Gi蛋白的抑制劑PTX處理轉(zhuǎn)基

4、因細(xì)胞，確定其G蛋白偶聯(lián)類型;用核因子NF-κB抑制劑BAY處理轉(zhuǎn)基因細(xì)胞，確定NF-κB信號(hào)通路是否參與GPR4的誘導(dǎo)過程。
　　結(jié)果:測(cè)序和酶切結(jié)果證實(shí)成功克隆到GPR4基因并獲得了pIRES-EGFP-GPR4真核表達(dá)載體;成功得到GPR4過表達(dá)的HUVEC細(xì)胞及干擾GPR4基因的HUVEC細(xì)胞。轉(zhuǎn)染GPR4重組細(xì)胞中，酸性刺激后IL-6，TNF-α的表達(dá)量明顯升高，LPC和質(zhì)子共同作用下能降低表達(dá);在GPR4干擾細(xì)胞中，酸

5、性刺激能降低IL-6，TNF-α的表達(dá)，LPC和質(zhì)子共同作用下能升高表達(dá);PTX對(duì)IL-6、TNF-α的表達(dá)不產(chǎn)生影響;BAY對(duì)IL-6、TNF-α的表達(dá)有抑制作用。
　　結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GPR4是調(diào)控HUVEC細(xì)胞IL-6、TNF-α表達(dá)的相關(guān)受體，與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。在過表達(dá)GPR4的HUVEC細(xì)胞中及GPR4干擾的HUVEC細(xì)胞中LPC對(duì)質(zhì)子引起的IL-6、TNF-α表達(dá)有抑制作用;GPR4以不依賴PTX的途徑參與質(zhì)子介導(dǎo)