趨化抗原基因疫苗的研究.pdf

1、DNA疫苗一直是腫瘤疫苗研究領域的熱點。然而，DNA疫苗的潛力有待進一步提高。在本研究中，聯(lián)合應用次級淋巴組織趨化性細胞因子(SLC)和IgGFc的佐劑效應來提高DNA疫苗的潛力。以HPV16的E7抗原為模型抗原，以pShuttle-CMV為真核表達載體，在E7基因的5’端連接SLC，在其3’端連接Fc基因，構建了嵌合體DNA疫苗pSLC-E7-Fc，同時，構建了pE7-Fc、pSLC-E7、pE7、pSLC、pFc和pCMV六種對照質

2、粒。 利用RT-PCR和WesternBlotting，證實了包括pSLC-E7-Fc在內的六種質粒都能被真核細胞有效表達。 以E7陽性的免疫原性好的C3細胞和免疫原性差的TC-1細胞為模型，進行了pSLC-E7-Fc疫苗的腫瘤預防與治療實驗。結果表明，在C3腫瘤治療實驗中(初始治療時腫瘤大小為6mmx6mm)，pSLC-E7-Fc免疫使100％的小鼠腫瘤完全消退，并長期生存；而其他組最高的腫瘤完全消退率未超過50％。在

3、TC-1腫瘤預防實驗中，pSLC-E7-Fc免疫使100％的小鼠不長瘤，而所有對照質粒免疫的小鼠全部成瘤；用三倍劑量的TC-1細胞對不長瘤的小鼠進行再攻擊，仍不出瘤，而對照組出瘤率為100％。在皮下接種TC-1細胞15天后開始免疫治療，pSLC-E7-Fc疫苗使72％的小鼠腫瘤完全消退，并長期存活。而pE7-Fc免疫僅使28％的小鼠腫瘤完全消退，其他對照組腫瘤持續(xù)生長，小鼠全部死亡。當皮下接種TC-1細胞30天后開始免疫，pE7-Fc免

4、疫組平均生存期為71天，而pSLC-E7-Fc免疫組平均生存期延長至91天(p＜0.01)。在TC-1肺轉移治療實驗中，與pE7-Fc相比，pSLC-E7-Fc免疫顯著減少了肺腫瘤結節(jié)數(shù)(p＜0.01)。以上結果說明，與對照相比，pSLC-E7-Fc能更有效地預防和治療E7陽性的C3和TC-1腫瘤。 為分析pSLC-E7-Fc疫苗抗腫瘤效應的機制，進行了體外淋巴細胞增殖實驗、CTL活性檢測、抗體滴度檢測以及體內CD4和CD8淋巴

5、細胞刪除實驗。結果表明，與對照質粒相比，pSLC-E7-Fc免疫的小鼠顯示了最高的E7特異的淋巴細胞增殖能力、CTL活性和抗體應答，這說明pSLC-E7-Fc可誘導有效的抗原特異性的細胞和體液免疫應答。而且，免疫前體內刪除和免疫后體外刪除CD4或CD8淋巴細胞表明，CD8淋巴細胞是pSLC-E7-Fc抗腫瘤效應的主要參與者。 為分析SLC在pSLC-E7-Fc誘導的細胞和體液免疫應答中所起的作用，進行了SLC-E7-Fc融合蛋白