孕婦孕期和分娩后胎兒游離DNA含量變化規(guī)律的研究.pdf

1、溫州醫(yī)科大學碩士學位論文目錄中文摘要??．．．??．????．．????????．．IA b s tr a c t ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3前言?????．．．．????????．?????．1 I 目q 呂?????．．．．????????．?????．研究背景??????????????????．．7第一部分孕期胎兒游離D N A 含量變化??

2、????????1 0材料和方法?????????????????．．1 0結(jié)果???????????????????．．1 6分析與討論?????????????????．．2 1第二部分分娩后D N A 清除規(guī)律的研究??????????2 4材料和方法?????????????????．．2 5結(jié)果???????????????????．．2 9分析與討論?????????????????．．3 8總結(jié)??????????????

3、?????．．4 0參考文獻??????????????????．4 1附錄???????????????????．．4 4附圖?????．?????．???????．?．．4 5致謝???????????????????．．4 8綜述及參考文獻?．．?????????????．．．．．4 9學位論文獨創(chuàng)性聲明???????????????5 8關(guān)于學位論文使用授權(quán)聲明?????????????5 8溫州醫(yī)科大學碩士學位論文早中期篩查高

4、風險或臨界高風險，年齡高風險、不適合羊水穿刺的產(chǎn)前診斷適應(yīng)征單胎妊娠孕婦，且羊水培養(yǎng)核型確診染色體異常者1 0 例( 2 1 一三體8 例，1 8 一三體2 例) ，孕周1 8 —2 5 周，知情同意下在選擇性終止妊娠前、終止妊娠胎兒分娩后1 5 m i n 、3 0 m i n 、6 0 m i n 、1 2 0 m i n 、3 h 、6 h 、9 h 、1 2 h 、2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 分別抽取外周血5 m L

5、 ，分離血漿進行高通量D N A測序，獲取2 1 染色體或1 8 染色體基因序列與所有序列比列的相對濃度，代表胎兒游離D N A相對含量，分析2 1 一三體$ N 1 8 一三體序列信息在孕婦體內(nèi)消失的規(guī)律性，是反應(yīng)核型異常胎兒游離D N A 在孕婦體內(nèi)消失的直接證據(jù)。結(jié)果：第一階段研究結(jié)果：通過高通量測序，獲得低覆蓋全基因組序列。計算Y 染色體序列與所有染色體序列比例，推算胎兒游離D N A 含量。本組數(shù)據(jù)顯示孕1 2 周時，胎兒游離

6、D N A就可達4 - 1 5 ％，1 2 —2 4 周期間雖有上升趨勢，但個體差異大，D N A 含量相對穩(wěn)定，孕周間無明顯差異。S P S S 1 7 ．0 統(tǒng)計分析表明胎兒游離D N A 含量與孕周( P = 0 ．0 0 1 ，P0 ．0 5 ) 無相關(guān)性。胎兒游離D N A 的濃度與產(chǎn)前篩查指標統(tǒng)計學分析結(jié)果顯示，胎兒游離D N A 與A F P ( P = 0 ．0 3 1 ，P0 ．0 5 ) 無相關(guān)性。正常組和異常組兩組

7、間胎兒游離D N A 含量t 檢驗分析結(jié)果顯示，異常組胎兒游離D N A 含量明顯高于正常組，差異有顯著性( t 一3 ．4 6 9 ，P < 0 ．0 1 ) 。第二階段研究結(jié)果：D N A 測序結(jié)果2 卜三體或1 8 一三體序列匹配統(tǒng)計分析顯示，孕婦2 卜三體或1 8 - _ 三體胎兒游離D N A 于分娩后快速被清除，產(chǎn)后0 —2 d ' 時的平均半衰期約為1 ．2 小時，產(chǎn)后6 —7 2 t J 、時為緩慢清除期，

8、平均半衰期約為1 1 ．7 小時，7 2 小時后檢測不至, J 2 1 ～三體或1 8 一三體的游離D N A 信息。結(jié)論：1 、孕1 2 周后9 3 ．5 ％胎兒游離D N A 含量達4 ％，可滿足高通量測序的檢測需求。2 、胎兒游離D N A 含量與孕周有一定相關(guān)性，2 5 周后呈正相關(guān)，本組胎兒游離D N A 含量< 4 ％的孕婦占6 ．5 ％，孕周均< 2 0 周。胎兒游離D N A 含量與孕婦體重負相關(guān)，每增力H

9、5 k g ，其外周血胎兒游離D N A 含量相應(yīng)降低。胎兒游離D N A 含量大于4 ％的檢出率也隨體重的增加而降低。孕婦體重和孕周是影響無創(chuàng)D N A 檢測檢出率的影響因素。3 、孕染色體非整倍體胎兒孕婦體內(nèi)游離D N A 含量高于孕正常胎兒，提示異常胎兒D N A 凋亡增加。孕染色體非整倍體孕婦分娩后胎兒游離D N A 迅速下降，7 2 小時消失，不干擾下一胎檢測。該結(jié)果基于孕異常染色體非整倍體人群，未見報道。4 、本研究數(shù)據(jù)為無