硅基熒光納米粒子標(biāo)記食源性病原菌檢測方法研究.pdf

1、目前，已報道的食源性致病菌檢測方法多種多樣，但各有其優(yōu)缺點。本文將納米探針技術(shù)與熒光分析方法結(jié)合應(yīng)用于免疫分析及DNA雜交分析，建立了新型分析方法體系，實現(xiàn)了對目標(biāo)物的超微量檢測。
　　 本文首先制備Ru(bpy)3Cl2摻雜SiO2熒光納米顆粒，并以其為標(biāo)記物，初步應(yīng)用于人IgG的檢測。在最佳實驗條件下，熒光強度和人IgG濃度在1～100 ng/mL范圍內(nèi)成線性，檢出限0.3 ng/mL。
　　 其次，論文對Ru(bp

2、y)3Cl2摻雜SiO2納米粒子進行親和素修飾，與生物素化的沙門氏菌序列特異寡核苷酸探針結(jié)合構(gòu)建熒光納米生物探針，以其為顯示探針與沙門氏菌序列特異寡核苷酸捕獲探針一起通過DNA雜交捕獲目標(biāo)DNA，通過檢測顯示探針熒光強度定量目標(biāo)DNA含量。結(jié)果表明，熒光強度和目標(biāo)DNA濃度在10～1000 fmol/L范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，檢出限3 fmol/L。采用同樣的原理構(gòu)建了金黃色葡萄球菌目標(biāo)DNA的新型分析方法，熒光強度與目標(biāo)DNA濃度在3～10

3、00 fmol/L范圍內(nèi)成線性，檢出限為1fmol/L。
　　 再次，論文基于分子信標(biāo)識別和熒光納米粒子標(biāo)記技術(shù)，建立了均相體系中李斯特菌目標(biāo)DNA的檢測新方法。以FITC-IgG@SiO2納米粒子和納米金分別標(biāo)記李斯特菌序列特異性分子信標(biāo)探針5’端和3’端，成功構(gòu)建了李斯特菌序列特異性分子信標(biāo)熒光納米探針，建立了均相體系中李斯特菌目標(biāo)DNA的新型分析方法。在實驗優(yōu)化條件下，熒光強度與目標(biāo)DNA濃度在1～200 nmol/L濃度