熒光磁性納米粒子標記骨髓間充質(zhì)干細胞靶向胃癌的研究.pdf

1、目的：
　　(l)建立一種高效、簡便的分離純化骨髓間充質(zhì)干細胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)的方法；
　　(2)明確熒光磁性納米粒子(fluorescent magnetic nanoparticles，F(xiàn)MNPs)標記骨髓間充質(zhì)干細胞的適當濃度；
　　(3)檢驗FMNPs體外標記BMSCs的效果；
　　(4)探討B(tài)MSCs靶向胃癌的遷移的能力。
　　方法：
　

2、　(1)利用貼壁培養(yǎng)法分離、純化大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞，流式細胞儀檢測骨髓間充質(zhì)干細胞CD29、CD90和CD45的表達情況，分別用成骨細胞和脂肪細胞誘導劑誘導干細胞檢測骨髓間充質(zhì)干細胞的分化能力；
　　(2)體外用不同濃度的FMNPs標記BMSCs，觀察不同濃度的FMNPs對細胞活力的影響，進而選取最佳標記的FMNPs濃度量；利用普魯士藍染色，激光共聚焦顯微鏡，核磁共振成像儀觀察熒光磁性納米粒子標記的干細胞體外成像效果；

3、　　(3)建立裸鼠的胃癌模型，應用小動物分子影像系統(tǒng)和核磁共振成像儀驗證靜脈注射被標記的BMSCs靶向胃癌的能力。
　　結(jié)果：
　　(1)利用貼壁培養(yǎng)法分離、純化大鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞，流式細胞儀檢測第三代BMSCs的CD29，CD90和CD45的陽性表達率分別為84.69％，90.28%，0.72%，堿性磷酸酶染色和油紅 O染色結(jié)果均表明骨髓間充質(zhì)干細胞成功分化為成骨細胞和脂肪細胞；
　　(2)熒光磁性納米粒子與骨髓

4、間充質(zhì)干細胞共同培養(yǎng)，不同時間點檢測干細胞存活率，進而選取熒光磁性納米粒子的最佳標記濃度為50?g/mL。普魯士藍染色，激光共聚焦成像和核磁共振成像表明熒光磁性納米粒子體外成功標記骨髓間充質(zhì)干細胞并且不影響細胞活性;
　　(3)建立裸鼠的胃癌模型，胃癌細胞 MGC803皮下注射入裸鼠體內(nèi)，四周后篩選成瘤效果好的裸鼠胃癌模型，并將標記后的干細胞尾靜脈注射入裸鼠體內(nèi)，14天后用小動物分子成像系統(tǒng)觀察到BMSCs遷移靶向到胃癌部位。隨后

5、，處死裸鼠，取出心、肺、肝、脾、腎和腫瘤塊進行器官離體熒光成像，結(jié)果顯示被標記組分的腫瘤呈現(xiàn)出顯著的熒光信號，除了肝（具有代謝異物的能力），其他臟器如心、脾、肺、腎都沒有熒光信號。對另一組FMNPs標記的BMSCs移植后的胃癌裸鼠模型進行MRI掃描，在腫瘤部位3.0 T的磁場強度下有清晰的磁共振信號。
　　結(jié)論：
　　(l)貼壁篩選法操作簡單，篩選出的細胞易于成活，是一種簡便有效的方法；
　　(2)適當濃度FMNPs能

6、夠高效標記BMSCs；
　　(3)BMSCs具有高度特異性地靶向胃癌的能力。
　　意義：
　　本實驗證明BMSCs具有靶向遷移到胃癌的能力。此外，BMSCs具有取材便捷、體外擴增能力強、基因轉(zhuǎn)染效率高、轉(zhuǎn)染后穩(wěn)定表達、可自體回輸從而避免了免疫排斥反應等特點，被認為是基因工程的理想種子細胞，這為以BMSCs為載體的胃癌靶向基因治療提供了理論依據(jù)。然而，目前關(guān)于BMSCs向胃癌細胞靶向遷移的分子機制尚未明確，有待于深入研究