藍(lán)莓提取物改善AD小鼠認(rèn)知功能的海馬蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　觀察藍(lán)莓提取物干預(yù)對阿爾茨海默病模型小鼠(APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠)認(rèn)知功能的改善作用，并通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究藍(lán)莓提取物干預(yù)對APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬組織蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響，以探討藍(lán)莓提取物改善阿爾茨海默病的分子機(jī)制。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)分為三部分，第一部分通過基因型鑒定確定動物飼養(yǎng)中心繁育幼鼠的基因型，從行為學(xué)（Morris水迷宮）及病理學(xué)兩方面進(jìn)行AD動物模型評價(jià);第二部分將APP/PS1轉(zhuǎn)基因

2、小鼠及同窩別正常小鼠分為3組:AD模型組（模型組）、藍(lán)莓干預(yù)組（干預(yù)組）及野生型對照組（對照組）。以灌胃方式進(jìn)行干預(yù)，干預(yù)組小鼠干預(yù)劑量為150mg/kg·bw·d，模型組及對照組小鼠灌胃超純水，干預(yù)時(shí)間3個(gè)月。通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力;病理學(xué)觀察小鼠海馬區(qū)域組織形態(tài)學(xué)改變;第三部分利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)制備模型組小鼠及干預(yù)組小鼠海馬組織的二維凝膠(2-DE)圖譜，使用Image Master2DPlatinum

3、5.0軟件進(jìn)行差異蛋白點(diǎn)分析，通過基質(zhì)輔助激光解析（串聯(lián)）飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(MALDI-TOF/TOF-MS)鑒定差異蛋白質(zhì)的種類，并通過Western blot確證關(guān)鍵蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.通過基因型鑒定成功確定繁育小鼠的基因型，APP/PS1種鼠后代的陽性率在40％～65％之間。Morris水迷宮結(jié)果顯示模型組小鼠逃避潛伏期明顯長于對照組小鼠(P＜0.05)，單位時(shí)間內(nèi)穿越平臺區(qū)域的次數(shù)顯著少于對照組(P

4、＜0.05);病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠海馬組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯異常，CA1區(qū)及CA3區(qū)神經(jīng)元失去正常結(jié)構(gòu)，細(xì)胞排列疏松紊亂、層數(shù)減少;錐體細(xì)胞大量喪失、數(shù)目減少，細(xì)胞聯(lián)結(jié)松懈，細(xì)胞周圍出現(xiàn)環(huán)狀帶，胞體縮小，細(xì)胞核出現(xiàn)固縮、凋亡，海馬區(qū)域可見剛果紅染色陽性表達(dá)。
　　2.干預(yù)期間，各組小鼠攝食量有所波動但總體變化趨勢一致，各組小鼠體重的變化幅度不大，模型組小鼠平均體重大于干預(yù)組和照組小鼠;Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯

5、示，與模型組小鼠比較，對照組及干預(yù)組小鼠逃避潛伏期明顯縮短（P＜0.05），單位時(shí)間內(nèi)穿越平臺區(qū)域的次數(shù)顯著增加(P＜0.05);病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，與模型組小鼠比較，干預(yù)組小鼠海馬雖仍有神經(jīng)元凋亡但海馬結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)異?，F(xiàn)象有所改善，海馬區(qū)域未見明顯剛果紅染色陽性表達(dá)。
　　3.成功建立小鼠海馬蛋白質(zhì)2-DE方法(系統(tǒng)重復(fù)性為83.0％，操作重復(fù)性為79.5％)，圖像分析共有12個(gè)蛋白點(diǎn)在模型組小鼠和干預(yù)組小鼠海馬組織表達(dá)有顯著性差

6、異，經(jīng)基質(zhì)輔助激光解析（串聯(lián)）飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF/TOF-MS)鑒定得到9種蛋白質(zhì)。其中，藍(lán)莓提取物干預(yù)后小鼠海馬組織表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)包括:α-烯醇酶(alpha-enolase)、蘋果酸脫氫酶(malate dehydrogenase)、蘋果酸脫氫酶1(malate dehydrogenase1)、磷酸化應(yīng)激蛋白1（stress-induced-phosphoprotein1）和T復(fù)合體蛋白1亞基β(T-complex

7、protein1subunit beta);表達(dá)上調(diào)的蛋白質(zhì)包括:細(xì)胞色素b-c1復(fù)合體亞基6(Cytochrome b-e1complex subunit6)、β-肌動蛋白(beta-actin)，動力蛋白1（Dynamin1）、熱休克同源蛋白71(heat shock cognate71)。Dynamin1與囊泡突觸循環(huán)密切相關(guān)，Western blot方法對小鼠海馬組織Dynamin1蛋白的表達(dá)量進(jìn)行確認(rèn)，結(jié)果與蛋白質(zhì)組學(xué)研究結(jié)果