慢性低度炎癥肥胖小鼠造模與模擬節(jié)食的抗炎減肥機理研究.pdf

1、目的：
　　隨著人類營養(yǎng)水平的提高和生活方式的改變，世界上超重及肥胖人口的比例越來越高，由肥胖帶來的健康和社會問題也越來越嚴重。因此，如何減肥并預防肥胖性疾病已成為當前公共衛(wèi)生領域最受關注的焦點和熱點。本研究擬通過比較高脂+高劑量脂多糖與高脂+低劑量脂多糖誘導的小鼠非炎癥及炎癥肥胖模型，證實我們提出的“慢性低度炎癥源于痕量細菌內(nèi)毒素”假說。在此基礎上，以小鼠炎癥肥胖模型評價潛在減肥單體藥及復方藥的療效，并解析其分子藥理學機制，以便

2、探索節(jié)食模擬（無熱量限制）抗炎減肥的可行性，并為今后制定更有效的減肥方案提供依據(jù)。
　　方法：
　　通過構建高脂飼料誘導的單純營養(yǎng)型肥胖小鼠模型、高脂+高/低劑量脂多糖誘導的模擬感染型肥胖小鼠模型和高脂+氯丙嗪誘導的鎮(zhèn)靜降耗型肥胖小鼠模型，采用形態(tài)學指標（體重曲線、體脂比和肝指數(shù)）、血清學指標（甘油三酯、膽固醇、轉氨酶、胰島素、瘦素水平）和基因組學指標（促炎癥細胞因子表達基因芯片和蛋白質(zhì)芯片），以經(jīng)典減肥藥2，4-二硝基苯酚

3、（因副作用嚴重早已被淘汰）作為陽性對照藥，分別對臨床抗瘧藥青蒿琥酯、心絞痛緩解藥硝酸甘油和民間試用但尚未批準上市的減肥中藥復方蘆薈蟲草丹的減肥效果進行比較研究，根據(jù)乳酸、一氧化氮、3-硝基酪氨酸、信號轉導分子、促炎癥細胞因子表達譜、脂肪肝相關基因表達微陣列和腸道菌群分類表型顯示等，探討肥胖的可能原因及減肥的可能途徑。
　　結果：
　　以高脂飼料為基礎的脂多糖或氯丙嗪造模均可在數(shù)周內(nèi)高效誘導小鼠肥胖（肥胖度增加20％以上），其

4、中高脂+脂多糖模型的體脂比（P＜0.01)、血清膽固醇含量（P＜0.05）和血清胰島素水平（P＜0.001）均顯著提高，高脂+氯丙嗪模型的谷丙轉氨酶活性顯著升高（P＜0.05)。利用高脂+低劑量脂多糖模型的療效評價結果表明，2，4-二硝基苯酚(16mg/kg)、青蒿琥酯(0.25mg/kg)和硝酸甘油(6mg/kg)均能使體脂比顯著降低（P＜0.05)，血清胰島素恢復到對照水平（P＜0.01），表明減肥效果顯著。
　　高脂+低劑量

5、脂多糖模型組的炎癥活化標志NF-κB mRNA顯著上調(diào)（P＜0.001），而3種單藥均使NF-κB mRNA大幅下調(diào)至對照水平。同時，模型組促炎癥細胞因子mRNA上調(diào)，而處理組促炎癥細胞因子mRNA下調(diào)。因此，消炎可能是2，4-二硝基苯酚、青蒿琥酯和硝酸甘油的重要減肥機理。此外，模型組中HO-1 mRNA和VEGF mRNA下調(diào)，處理組中青蒿素則使其上調(diào)，提示有促血管再生作用。
　　為了探討高脂+脂多糖在誘發(fā)非酒精性脂肪肝病中的可

6、能作用，我們利用微陣列分析評價了高脂+高劑量(1.2mg/kg)脂多糖與低劑量(0.25mg/kg)脂多糖誘導肥胖小鼠血清中40種促炎癥細胞因子及肝臟中84種脂肪肝相關基因表達水平。結果表明，高脂+高劑量脂多糖僅輕微上調(diào)促炎癥細胞因子及部分活化脂肪肝相關基因，而一氧化氮及3-硝基酪氨酸水平先升后降，推測高劑量脂多糖可能誘生抗脂多糖抗體并清除脂多糖，從而減輕脂多糖誘導脂肪在肝臟的蓄積。相反，高脂+低劑量脂多糖可大幅上調(diào)促炎癥細胞因子并大量

7、活化脂肪肝相關基因，但經(jīng)給藥治療后表達水平全部恢復正常。
　　高脂誘導肥胖小鼠模型的體脂比和肝指數(shù)均比對照高，差異達到極顯著水平（P＜0.001)，血清膽固醇含量的差異也達到顯著水平（P＜0.05)。用蘆薈蟲草丹灌胃后，處理組的體脂比和肝指數(shù)均比模型組低，其中造模前給藥的下降程度達到極顯著水平（P＜0.01)，造模后給藥的下降程度達到顯著水平(P＜0.05)，表明該藥不僅能預防肥胖，而且能治療肥胖。通過腸道菌群分類培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，蘆薈蟲

8、草丹能加速體內(nèi)大腸桿菌生長并促進帶菌排便，也能促進體外培養(yǎng)的大腸桿菌增殖，表明該藥可能通過排菌清腸達到減肥目的。
　　結論：
　　本研究首次發(fā)現(xiàn)低劑量脂多糖可誘發(fā)全身慢性低度炎癥，并證實抗瘧藥青蒿琥酯和緩解心絞痛藥硝酸甘油能模擬2，4-二硝基苯酚發(fā)揮其潛在減肥作用，還闡明了3種單體藥消炎、抗缺氧、抗DNA損傷和抗血管新生的減肥機理，同時也驗證了1種復方藥的排菌清腸減肥機理。由于非熱量限制（不節(jié)食）減肥方式更易被人接受，因此這