P物質(zhì)對(duì)腦膜炎奈瑟菌抗原誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)COX-2及分泌PGE2的影響及分子機(jī)制初探.pdf

1、目的:觀察P物質(zhì)對(duì)腦膜炎奈瑟菌抗原（NMA）誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞（MG）表達(dá)環(huán)氧化酶2（COX-2）及產(chǎn)生前列腺素E2（PGE2）的影響，并初步探討其可能發(fā)生的作用機(jī)制。
　　方法:體外原代培養(yǎng)大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞，并根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃?組：（1）空白對(duì)照組（僅給予等體積DMEM/F12培養(yǎng)基）；（2）NMA處理組（加入10μg/ml超聲處理的粗抗原作用8h）；（3）單純SP組（加入1 nmol/L SP作用8h）；（4）SP組+NMA組

2、：抗原刺激的同時(shí)加入1 nmol/L SP作用8h；（5）SP受體拮抗劑組：小膠質(zhì)細(xì)胞加入10nmol/L SP受體拮抗劑L-703,606預(yù)處理15min。處理結(jié)束后，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)COX-2 mRNA的表達(dá)，ELISA檢測(cè)PGE2產(chǎn)生，Western blot分析核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB p65亞基的轉(zhuǎn)位以及PGE2受體EP2和EP4的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示，單純SP處理組或單純NMA處理組C

3、OX-2 mRNA表達(dá)水平均明顯高于陰性對(duì)照組，分別為（0.24±0.061 VS0.03±0.032,P<0.05）和（0.32±0.042 VS0.03±0.032, P<0.05），而同時(shí)進(jìn)行SP和NMA共同孵育后，COX-2 mRNA水平顯著高于NMA單獨(dú)處理組（0.80±0.052 VS0.32±0.042, P<0.05）。此外，用SP受體拮抗劑L-703,606處理MG后，能降低SP對(duì)COX-2 mRNA表達(dá)的協(xié)同作用（0

4、.43±0.086 VS0.80±0.052,P<0.05）。
　　2. ELISA結(jié)果顯示，單純SP能在一定程度上誘導(dǎo)MG細(xì)胞產(chǎn)生PGE2，[(24.35±4.27) pg/mL VS(18.45±3.31) pg/mL,P<0.05]，單純NMA能誘導(dǎo)MG細(xì)胞分泌PGE2水平明顯增高[（47.52±10.34）pg/mLVS(18.45±3.31) pg/mL, P<0.05）]；NMA和SP共同孵育后，PGE2分泌水平較NM

5、A對(duì)照組顯著增高[（126.47±14.68）pg/mL, P<0.05）。而L-703,606預(yù)處理后，PGE2分泌水平較SP＋NMA組明顯降低[（59.61±5.52）pg/mL, P<0.05]。
　　3. Western blot結(jié)果顯示，NMA刺激MG后，NF-κB p65亞基轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核水平較陰性對(duì)照組明顯增高（P<0.05）。而NMA與SP聯(lián)合作用后，細(xì)胞核中p65水平較NMA對(duì)照組顯著增高。SP受體拮抗劑 L-7

6、03,606預(yù)處理能降低SP＋NMA誘導(dǎo)的p65轉(zhuǎn)位。
　　4.單純NMA或SP處理組對(duì)PGE2受體EP2、EP4表達(dá)水平無明顯影響。而NMA聯(lián)合SP處理4h后，EP2和EP4受體表達(dá)水平顯著增高。L-703,606預(yù)處理后，SP＋NMA誘導(dǎo)的EP2和 EP4表達(dá)水平明顯降低。
　　結(jié)論:
　　1．SP能協(xié)同NMA誘導(dǎo)MG表達(dá)COX-2 mRNA和分泌PGE2增加，并能促進(jìn)前列腺素受體EP2和EP4表達(dá)增加；