咖啡因影響HBx（+）肝細(xì)胞合成PGE2的特點(diǎn)及機(jī)制.pdf

1、目的：
　　咖啡是一種常見的飲品，其主要成份咖啡因的各種生物學(xué)活性作用也被廣泛研究，特別是在疾病的防治方面被認(rèn)為有積極作用。不斷有研究顯示飲用咖啡能夠減低肝癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。PGE2為環(huán)加氧酶合成的最具生物學(xué)活性的重要產(chǎn)物之一，研究證明惡性腫瘤組織中PGE2水平明顯增高，能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。因此，抑制PGE2的產(chǎn)生也成為防止炎癥向癌癥轉(zhuǎn)變的一種有價(jià)值的研究方向。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)許多可以減少細(xì)胞產(chǎn)生 PGE2的藥物或化合物，它們可通過破壞

2、PGE2產(chǎn)生過程中的各種酶或影響其基因表達(dá)來實(shí)現(xiàn)。本研究通過觀察咖啡因?qū)Ω渭?xì)胞株HL7702、HL7702-HBx、HepG2和HepG2-HBx肝細(xì)胞增殖的影響，探討咖啡因影響HBx(+)肝細(xì)胞合成PGE2的特點(diǎn)及機(jī)制。
　　方法：
　　構(gòu)建表達(dá)HBx的肝細(xì)胞株HL7702-HBx和HepG2-HBx；采用四唑藍(lán)比色法觀察咖啡因?qū)Bx(+)肝細(xì)胞生長(zhǎng)的影響、ELISA法比較咖啡因影響HBx(+)和HBx(-)肝細(xì)胞株細(xì)胞

3、中分泌 PGE2的差異、 Western blot檢測(cè)咖啡因影響 PGE2分泌的PPARγ-EGR1-mPGES-1軸相關(guān)蛋白的表達(dá)以及采用熒光報(bào)告分析咖啡因?qū)Bx(+)肝細(xì)胞COX-2和mPGES-1啟動(dòng)子活性的影響。
　　結(jié)果：
　　咖啡因?qū)λ闹昙?xì)胞的增殖抑制作用均隨著藥物的濃度增加而增加，在800μM濃度時(shí)最明顯（P<0.05）；咖啡因?qū)λ闹昙?xì)胞的抑制作用在加藥后第4天就開始起作用，具有濃度依賴性和時(shí)間依賴性?？Х纫?/p>

4、對(duì)HL7702-HBx和HepG2-HBx細(xì)胞的抑制作用在800μM和加藥7天時(shí)效果最為明顯，均顯著高于HL7702和HepG2細(xì)胞（P<0.05）?？Х纫颍?00μM）作用后的1、4、7天后，四株細(xì)胞分泌PGE2的量均逐漸減少（P<0.05），咖啡因?qū)L7702-HBx和HepG2-HBx細(xì)胞分泌的PGE2抑制作用幅度高于HL7702和HepG2細(xì)胞。Western-blot檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)咖啡因?qū)λ闹昙?xì)胞COX2蛋白表達(dá)的影響不明顯（

5、P>0.05）；而四株細(xì)胞在加咖啡因情況下 mPGES-1的蛋白表達(dá)明顯低于不加咖啡因組（P<0.05），且加咖啡因后HL7702-HBX和HepG2-HBx細(xì)胞株mPGES-1的蛋白表達(dá)明顯低于HL7702和HepG2細(xì)胞株。四株細(xì)胞在咖啡因存在情況下，檢測(cè)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mPGES-1及COX-2的啟動(dòng)子報(bào)告基因48小時(shí)后的熒光活性，發(fā)現(xiàn)四株細(xì)胞的COX-2啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性對(duì)于加藥與不加藥的影響變化不大（P>0.05）；而對(duì)于mPGES-1啟

6、動(dòng)子活性，四株細(xì)胞在加藥情況下比不加藥情況下明顯下調(diào)（P<0.05），且加藥后HL7702-HBx和HepG2-HBx細(xì)胞株mPGES-1啟動(dòng)子活性較HL7702和HepG2細(xì)胞株下降更明顯（P<0.05）。在咖啡因的作用下，肝細(xì)胞的mPGES-1和EGR1蛋白表達(dá)均下調(diào)，PPARγ蛋白表達(dá)上調(diào)，而HBx(+)肝細(xì)胞的這些指標(biāo)變化更顯著（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　咖啡因在HBx(+)肝細(xì)胞中可以通過EGR1影響mPG