混合細胞性肝癌的臨床病理特征、免疫學特征及起源的研究.pdf

1、第一部分:混合細胞性肝癌的臨床病理特征及預后研究
　　目的:
　　回顧性分析混合細胞性肝癌患者的臨床病理資料及隨訪資料，探討該類型原發(fā)性肝癌的臨床病理特征及預后情況。
　　方法:
　　收集2007年1月-2012年1月于中南大學湘雅二醫(yī)院普外科和湖南省人民醫(yī)院肝膽外科行肝切除手術治療的38例混合細胞性肝癌患者的臨床病理資料及隨訪資料，并分別與同期于中南大學湘雅二醫(yī)院普外科行肝切除手術治療的肝細胞癌患者和膽管細胞癌

2、患者各40例的臨床病理資料及隨訪資料進行對比分析。
　　結果:
　　(1)混合細胞性肝癌組與肝細胞癌組在血清CA19-9水平、肝門淋巴結轉移、侵及周圍臟器、侵犯肝被膜以及腫瘤細胞病理分化程度5個方面存在顯著差異。
　?。?)混合細胞性肝癌組與膽管細胞癌組在性別、血清HBsAg陽性率、血清AFP陽性率、血清CA19-9水平、肝硬化、腫瘤大小、門靜脈癌栓、侵犯肝被膜及腫瘤細胞病理分化程度9個方面存在顯著差異。
　　(

3、3)混合細胞性肝癌組患者總的1、3、5年生存率分別是71.1％、36.8％、7.9％。肝細胞癌組患者總的1、3、5年生存率分別是87.5％、55.0％、15.0％。膽管細胞癌組患者總的1、3、5年生存率分別是57.5％、15.0％、0.0％?；旌霞毎愿伟┙M與肝細胞癌組、膽管細胞癌組的1、3、5年總生存率均有顯著差異，介于肝細胞癌組與膽管細胞癌組之間。
　　(4)混合細胞性肝癌組的中位生存時間為25個月，肝細胞癌組的中位生存時間是

4、38個月，膽管細胞癌組的中位生存時間是14個月。
　　(5)單因素分析得出血清CA19-9、有無肝硬化、腫瘤大小、肝門淋巴結轉移、門靜脈癌栓、侵犯肝被膜、手術根治性切除率、病理分化程度是混合細胞性肝癌預后的相關因素;肝硬化、腫瘤大小、門靜脈癌栓、侵犯肝被膜、手術根治性切除率、病理分化程度是肝細胞癌預后的相關因素;而腫瘤大小、肝門淋巴結轉移、侵及周圍臟器、手術根治性切除率是膽管細胞癌預后的相關因素。
　　(6)多因素分析顯示影

5、響混合細胞性肝癌預后的獨立因素為:肝門淋巴結轉移、門靜脈癌栓、手術根治性切除率;影響肝細胞癌預后的獨立因素為:肝硬化、門靜脈癌栓、手術根治性切除率;影響膽管細胞癌預后的獨立因素為:肝門淋巴結轉移、侵及周圍臟器、手術根治性切除率。
　　結論:
　　1、混合細胞性肝癌的臨床病理特征介于肝細胞癌與膽管細胞癌之間，但更傾向于肝細胞癌的臨床特征，但其腫瘤侵襲力較肝細胞癌及膽管細胞癌強。
　　2、混合細胞性肝癌的預后亦介于肝細胞癌

6、與膽管細胞癌之間，明顯較肝細胞癌差，但卻較膽管細胞癌好。
　　3、影響混合細胞性肝癌術后總生存率的獨立預后影響因子為:肝門淋巴結轉移、門靜脈癌栓及手術根治性切除率。
　　4、血清CA19-9水平可能代表混合細胞性肝癌中的膽管細胞癌成分，但并非影響其預后的獨立危險因素。
　　第二部分:混合細胞性肝癌中腫瘤浸潤Foxp3+調節(jié)性T細胞的表達及其與預后關系的研究
　　目的:
　　檢測三種不同類型的原發(fā)性肝癌的腫瘤

7、微環(huán)境中Foxp3+調節(jié)性T細胞和其他類型淋巴細胞（CD4+T細胞、CD8+T細胞）的浸潤情況及浸潤特點，以此評價瘤灶內和瘤周組織中Foxp3+調節(jié)性T細胞浸潤情況在混合細胞性肝癌中的預后價值。
　　方法:
　　應用免疫組織化學方法分別檢測第一部分中的38例混合細胞性肝癌患者及40例肝細胞癌和40例膽管細胞癌患者的石蠟組織標本中瘤周和瘤內CD4+T細胞、CD8+T細胞及Foxp3+調節(jié)性T細胞的表達情況，比較分析這些細胞在三

8、組類型原發(fā)性肝癌組織中表達的差異性，并分別分析混合細胞性肝癌組瘤周和瘤內組織Foxp3+調節(jié)性T細胞數(shù)與CD4+T細胞數(shù)、CD8+T細胞數(shù)及其臨床病理特征的相關性，并分別運用單因素分析和多因素分析判斷三組原發(fā)性肝癌組織中淋巴細胞浸潤情況與預后的關系。
　　結果:
　　1、三種類型的原發(fā)性肝癌腫瘤微環(huán)境中浸潤的淋巴細胞在癌灶區(qū)域多呈彌散分布，在瘤周組織中，則可見大量的淋巴細胞密集分布，呈淋巴樣聚集趨勢，三組類型肝癌瘤周組織浸潤

9、的CD4+T細胞、CD8+T細胞及Foxp3+調節(jié)性T細胞絕對數(shù)均大于瘤內組織浸潤的相應細胞絕對數(shù)(P＜0.001)。而混合細胞性肝癌組中瘤內組織的Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值明顯高于瘤周組織(P＜0.001)，膽管細胞癌組中瘤內組織的Foxp3+Treg細胞/CD4+T細胞比值亦明顯高于瘤周組織(P＜0.001)。
　　2、混合細胞性肝癌組與肝細胞癌組間瘤周Foxp3+Treg細胞/CD4+T細胞比值（P=0.0

10、02）、Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值(P=0.005)及瘤內Foxp3+Treg細胞(P=0.003)、Foxp3+Treg細胞/CD4+T細胞比值（P=0.004）、Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值(P=0.0005)有明顯統(tǒng)計學差異。
　　3、混合細胞性肝癌組與膽管細胞癌組之間瘤周CD8+T細胞數(shù)目（P=0.017）、Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值(P=0.020)及瘤內Foxp3+T

11、reg細胞數(shù)(P=0.028)有明顯統(tǒng)計學差異。
　　4、混合細胞性肝癌瘤周組織FoxP3+調節(jié)性T細胞計數(shù)與CD8+T細胞計數(shù)呈顯著負相關(rs=-0.587，P＜0.001)，而與CD4+T細胞數(shù)目無明顯相關性;而瘤內組織FoxP3+調節(jié)性T細胞計數(shù)與CD8+T細胞計數(shù)、CD4+T細胞計數(shù)均無顯著相關性;而僅瘤周Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值與腫瘤細胞的病理分化程度及門靜脈癌栓形成顯著相關。
　　5、單因素

12、生存分析示瘤內組織Foxp3+Treg細胞數(shù)目及Foxp3+Treg細胞/CD4+T細胞比值、瘤周組織Foxp3+Treg細胞數(shù)目、CD8+T細胞數(shù)目及Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值是混合細胞性肝癌預后相關因素;瘤內組織Foxp3+Treg細胞數(shù)目及Foxp3+Treg細胞/CD4+T細胞比值、瘤周組織Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值是肝細胞癌的預后相關因素;瘤內組織Foxp3+Treg細胞數(shù)目、瘤周組織Fox

13、p3+Treg細胞數(shù)目、CD8+T細胞數(shù)目及Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值是膽管細胞癌的預后相關因素。
　　6、多因素分析顯示瘤內組織Foxp3+Treg細胞數(shù)目、瘤周組織Foxp3+Treg細胞數(shù)目及Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值是混合細胞性肝癌的獨立預后因素;瘤內組織Foxp3+Treg細胞數(shù)目及瘤周組織Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值是肝細胞癌的獨立預后因素;瘤周組織Foxp3+Tre

14、g細胞數(shù)目及Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值是膽管細胞癌的獨立預后因素。
　　結論:
　　1、三種類型原發(fā)性肝癌的腫瘤微環(huán)境浸潤淋巴細胞的分布均表現(xiàn)為瘤內區(qū)呈彌散分布，瘤周區(qū)呈大量集中分布趨勢，且瘤周組織浸潤的CD4+T細胞、CD8+T細胞及Foxp3+調節(jié)性T細胞絕對數(shù)均大于瘤內組織浸潤的相應細胞絕對數(shù)。
　　2、混合細胞性肝癌組腫瘤微環(huán)境浸潤淋巴細胞的免疫學特征介于肝細胞癌組與膽管細胞癌組之間，但更傾向

15、于膽管細胞癌組。
　　3、混合細胞性肝癌患者瘤周組織浸潤的Foxp3+調節(jié)性T細胞與CD8+T細胞毒性T細胞數(shù)量呈顯著負相關，且瘤周Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值與腫瘤細胞的病理分化程度及門靜脈癌栓形成顯著相關，且該比值越高，病理分化程度越低，門靜脈癌栓形成率則越高。
　　4、瘤內組織浸潤的Foxp3+調節(jié)性T細胞數(shù)量、瘤周組織浸潤Foxp3+調節(jié)性T細胞數(shù)量及Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值是混合

16、細胞性肝癌的獨立預后因素，均與其總生存率顯著負相關。且影響肝細胞癌和膽管細胞癌獨立預后的免疫學因素均為混合細胞性肝癌的獨立預后因素。
　　5、瘤周組織浸潤的Foxp3+Treg細胞/CD8+T細胞比值是三類原發(fā)性肝癌共同的獨立預后因素，對原發(fā)性肝癌患者的術后總生存率起關鍵作用。
　　第三部分:混合細胞性肝癌的起源研究
　　目的:
　　探討肝卵圓細胞與混合細胞性肝癌起源的相關性，以期為混合細胞性肝癌的治療提供新的思

17、路。
　　方法:
　　應用免疫組織化學方法及免疫熒光化學方法分別檢測第一部分中的38例混合細胞性肝癌患者及40例肝細胞癌和40例膽管細胞癌患者癌組織中肝卵圓細胞表面標志物AFP、CK7、CK19、OV-6及C-kit在三類原發(fā)性肝癌組織中的表達情況，并分別比較混合細胞性肝癌組與肝細胞癌組、膽管細胞癌組之間的差異。
　　結果:
　　1、混合細胞性肝癌組CK7陽性表達率顯著高于肝細胞癌組(x2=20.53，P＜0.0

18、5)，而與膽管細胞癌組無顯著差異(P＞0.05)。
　　2、混合細胞性肝癌組CK19陽性表達率顯著高于肝細胞癌組(x2=34.78，P＜0.05)，而與膽管細胞癌組無顯著差異(P＞0.05)。
　　3、混合細胞性肝癌組CK7或CK19陽性表達率顯著高于肝細胞癌組(x2=31.39，P＜0.05)，而與膽管細胞癌組無顯著差異(P＞0.05)。
　　4、混合細胞性肝癌組AFP陽性表達率顯著高于膽管細胞癌組(x2=25.97

19、，P＜0.05)，而與肝細胞癌組無顯著差異(P＞0.05)。
　　5、C-kit在三組原發(fā)性肝癌組織中的陽性表達率分別為:混合細胞性肝癌組為5.26％(2/38)，肝細胞癌組為0.00％(0/40)，膽管細胞癌組為0.00％(0/40)。
　　6、混合細胞性肝癌組OV-6陽性表達率均顯著高于肝細胞癌組(x2=34.64，P＜0.05)和膽管細胞癌組(x2=43.49，P＜0.05)。
　　7、混合細胞性肝癌組CK7或C

20、K19與AFP均陽性表達率均顯著高于肝細胞癌組（x2=15.00，P＜0.05）和膽管細胞癌組(x2=23.93，P＜0.05)。
　　8、混合細胞性肝癌組中，24/31(77.42％)例OV-6陽性患者同時表達膽管細胞癌分子表型標志物（CK7或CK19）和肝細胞癌分子表型標志物(AFP);肝細胞癌組中，6/6(100.00％)例OV-6陽性患者均同時表達膽管細胞癌分子表型標志物（CK7或CK19）和肝細胞癌分子表型標志物(AFP

21、);膽管細胞癌組中，3/3(100.00％)例OV-6陽性患者均同時表達膽管細胞癌分子表型標志物（CK7或CK19）和肝細胞癌分子表型標志物(AFP)。
　　9、混合細胞性肝癌組中，2/2(100.00％)例C-kit陽性均同時表達膽管細胞癌分子表型標志物（CK7或CK19）和肝細胞癌分子表型標志物(AFP)及OV-6。
　　10、混合細胞性肝癌中肝細胞癌成分AFP陽性表達率65.79％與肝細胞癌組57.50％無顯著差異(P

22、＞0.05)，而明顯高于膽管細胞癌組10.00％（x2=25.97，P＜0.05）;而其膽管細胞癌分子表型標志物(CK7或CK19)陽性表達率86.84％遠高于單純肝細胞癌組30.00％(x2=28.49，P＜0.05)，而與膽管細胞癌組87.50％無顯著差異(P＞0.05)。
　　11、混合細胞性肝癌中膽管細胞癌成分的肝細胞癌分子表型標志物(AFP)陽性表達率60.53％遠高于單純膽管細胞癌組的10.00％(x2=21.98，P

23、＜0.05)，而與單純肝細胞癌組的57.50％無顯著差異(P＞0.05)。而其膽管細胞癌分子表型標志物（CK7或CK19），膽管細胞癌成分的陽性表達率92.11％與單純膽管細胞癌組的87.50％無明顯差異(P＞0.05)，但遠高于單純肝細胞癌組的30.00％(x2=31.39，P＜0.05)。
　　結論:
　　1、混合細胞性肝癌在分子表型上既具有肝細胞癌特征，又具有膽管細胞癌特征。
　　2、OV-6可能是肝卵圓細胞比較