嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒全基因組基因的克隆及SARS-Cov分子富集檢測(cè)體系的研究.pdf

1、由于SARS的高度傳染性,對(duì)SARS患者及早診斷、及早隔離是阻斷SARS傳染鏈,防止SARS傳播、蔓延的有效途徑.WHO總結(jié)了全球科學(xué)家的研究成果,認(rèn)為SARS的早期診斷主要依靠以RT-PCR技術(shù)為主的病原體核酸檢測(cè).本研究根據(jù)國(guó)際基因庫(kù)公布的SARS基因序列,利用分子生物學(xué)軟件選定了SARS冠狀病毒基因的高保守區(qū)域,并在此區(qū)域設(shè)定了巢式RT-PCR檢測(cè)體系;并利用自行制備的帶有目的片段的克隆,制備目的RNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),進(jìn)行巢式RT-PC

2、R檢測(cè)體系的各種條件優(yōu)化和敏感度評(píng)價(jià).結(jié)果表明,使用SuperScript Ⅱ逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)時(shí),檢測(cè)體系最低可檢測(cè)到1個(gè)拷貝/反應(yīng),而使用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)時(shí),檢測(cè)體系最低可檢測(cè)到10個(gè)拷貝/反應(yīng).以確立的磁捕法SARS冠狀病毒RNA富集體系為基礎(chǔ),本研究還初步探索了SARS冠狀病毒RNA的磁捕提取方法.結(jié)果表明,對(duì)于SARS冠狀病毒培養(yǎng)物,磁捕提取方法可穩(wěn)定地提取到SARS冠狀病毒RNA,具有特異性高、富集能力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn),該項(xiàng)研究可為今后