心肌缺血預處理第一相的保護機制的實驗研究.pdf

1、第一部分：SD大鼠心肌缺血預處理模型的建立及評估 研究目的：1.通過建立SD大鼠心肌缺血預處理模型，取血清測心肌酶譜并觀察心肌的組織切片和超微結構，評估預處理心肌保護作用。 2.通過觀察心肌缺血預處理過程中PTK活性的變化，旨在探討心肌缺血預處理第一相對心肌細胞蛋白質的磷酸化的調控作用。 3.通過應用大鼠在體缺血/再灌注模型，探討心肌缺血預處理第一相對一氧化氮合酶—一氧化氮系統(tǒng)的影響。 4.通過應用大鼠在

2、體缺血/再灌注模型，探討心肌缺血預處理第一相時第二信使系統(tǒng)的變化及其意義。 方法和結果：本研究共分四部分第一部分：SD大鼠心肌缺血預處理模型的建立及評估方法：首先應用套管法制作在體大鼠心肌缺血/再灌注損傷模型: 用手術套管法造成左冠狀動脈主干缺血及再灌注。實驗中以左室前壁紫紺及同步心電圖標S-T段抬高為結扎成功標志。實驗動物隨機分為缺血預處理組、缺血/再灌注組、假手術組。實驗結束后，取血離心分離血清，檢測心肌酶譜CK，CK-MB

3、，LDH的活性。采用電子透射顯微鏡觀察心肌超微結構的變化。 結果：CK，CK-MB，LDH缺血預處理組較缺血/再灌注組顯著降低,缺血預處理組與假手術組之間,CK、CK-MB顯著差異,LDH未見明顯差異。缺血預處理組: 少數線粒體輕、中度固縮或腫脹，嵴排列尚整齊，偶見斷裂；肌節(jié)清晰，可見小灶性肌絲溶解；內質網輕度擴張；仍可見糖原顆粒；肌纖維排列尚整齊。 第二部分：心肌缺血預處理對細胞蛋白質磷酸化的調控作用的實驗 研

4、究方法：應用套管法制作在體大鼠心肌缺血/再灌注損傷模型。隨機分為預處理組、缺血/再灌注組、假手術組、預處理程序組。預處理程序組根據預處理程序進一步分為第1，2，3次缺血組和第1，2，3次再灌注組。于實驗程序結束取心肌勻漿后，離心制備胞漿，Lowry法測定蛋白含量，生化法測定PTK活性。 結果：缺血預處理組PTK活性明顯高于缺血再灌注組，兩者間存在顯著性差異。PTK含量隨缺血及再灌注呈周期性波動。5min缺血期相對于同一周期中的5

5、min再灌注期顯著差異。5min缺血預處理時明顯增高，間隔再灌注時明顯下降。 第三部分心肌缺血預處理對一氧化氮合酶-一氧化氮系統(tǒng)的影響 方法：取上清用于NO含量及NOS的活性測量。心肌石蠟包埋，SABC法內皮型NOS免疫組織化學分析。 結果：NO含量及NOS活性缺血預處理組高于缺血/再灌注組，差別顯著。持續(xù)缺血前預處理程序中NO含量隨缺血及再灌注呈周期性波動。NO在預處理程序中，5min缺血期相對于同一周期中的5

6、min再灌注期存在顯著性差異。5min缺血時明顯增高，間隔再灌注明顯下降。內皮型NOS在心肌缺血預處理組及缺血/再灌注組中均有表達。內皮型NOS含量在缺血預處理組明顯高于缺血/再灌注組，灰度平均值兩組也存在顯著性差異。 第四部分：第二信使在缺血預處理第一相中介導作用的實驗 研究方法：所有實驗動物在實驗程序結束后, 胞漿應用放射免疫法測量cAMP，cGMP含量及cAMP/cGMP的變化。 結果：缺血預處理組cAMP

7、，cGMP含量明顯高于缺血/再灌注組，兩者存在顯著性差異。心肌缺血預處理程序中cAMP，cGMP含量隨缺血及再灌注呈周期性波動。預處理程序中，cAMP，cGMP含量5min缺血期相對于同一周期中的5min再灌注期，差異顯著。5min缺血預處理時明顯增高，間隔再灌注程序中明顯下降。 結論： 1.本實驗應用大鼠左冠狀動脈主干反復缺血/再灌注損傷建立心肌缺血預處理模型。 2.心肌缺血預處理可維持細胞膜完整性，減少心肌酶