小分子化合物對(duì)CaCCs的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、　　鈣激活氯通道(CaCCs)廣泛的分布于脊椎和非脊椎動(dòng)物的各種組織中，因其可以被細(xì)胞內(nèi)部鈣離子所激活而得名，所介導(dǎo)的電流稱為鈣激活氯電流。CaCCs參與了多種生理過程，包括跨上皮細(xì)胞分泌、神經(jīng)元興奮、平滑肌收縮和爪蟾卵母細(xì)胞受精過程等。2008 年末，相繼有三個(gè)實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn) TMEM16A(亦稱 ANO1)是 CaCCs的分子基礎(chǔ)，這使得進(jìn)一步研究CaCCs在生理學(xué)、藥理學(xué)和病理學(xué)方面的作用機(jī)制成為可能。
　　目前對(duì)CaCCs

2、研究主要的困難在于缺乏對(duì)CaCCs/TMEM16A顯示特異性調(diào)節(jié)作用的物質(zhì)，特別是小分子物質(zhì)。另一方面， CaCCs 通道功能異常會(huì)誘發(fā)多種疾病，如：囊性纖維化、干燥綜合癥、胃腸功能紊亂、高血壓、哮喘和某些癌癥，而治愈或緩解這些癥狀就需要特異性的開放劑或抑制劑，所以CaCCs/TMEM16A也已經(jīng)成為治療上述疾病潛在的藥物靶點(diǎn)。本論文旨在采用膜片鉗和激光共聚焦熒光顯微成像技術(shù)篩選特異性作用于CaCCs/TMEM16A通道的天然小分子化合

3、物，主要研究內(nèi)容如下：
　　(1)在本研究組前期工作的基礎(chǔ)上，本文采用膜片鉗全細(xì)胞、內(nèi)面向外兩種模式和熒光顯微成像技術(shù)，深入系統(tǒng)的研究了殼寡糖對(duì)于TMEM16A離子通道的激活作用，并比較殼寡糖個(gè)單體(DP2-DP6)對(duì)通道激活作用的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果確認(rèn)了殼寡糖對(duì)通道活性的激活作用，并初步探索了該激活作用的作用機(jī)制。
　　(2)首次利用殼寡糖作為 TMEM16A 通道開放劑，對(duì)高通量藥物篩選的實(shí)驗(yàn)方法加以改進(jìn)，減小了多次

4、轉(zhuǎn)染對(duì)細(xì)胞造成的傷害，簡化了實(shí)驗(yàn)流程，并使之適用于激光共聚焦顯微鏡實(shí)驗(yàn)，并與文獻(xiàn)報(bào)道的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行對(duì)比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果確認(rèn)了本論文對(duì)于實(shí)驗(yàn)方法改進(jìn)的合理性和可行性。
　　(3)首次利用改進(jìn)的篩選方法對(duì)本文初步確定的幾種中藥小分子化合物進(jìn)行篩選，包括柴胡皂苷 d、肉桂酸、葛根素、甜菜堿、甘草次酸。篩選實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)其中的甜菜堿對(duì)TMEM16A通道有抑制作用，進(jìn)一步的膜片鉗實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甜菜堿是通過穩(wěn)定TMEM16A關(guān)閉構(gòu)象抑制其活性的。