耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的原因及沙門氏菌SPI-1功能研究.pdf

1、研究目的:闡明耐藥結(jié)核病產(chǎn)生的原因?qū)τ谡_評估臨床治療方案、制定切實有效的控制措施具有重要的意義。但傳統(tǒng)方法無法鑒別耐藥的產(chǎn)生是由同一菌株還是不同的菌株引起，本研究利用分子流行病學方法通過對上海地區(qū)1999年1月至2004年3月有治療史且耐藥表型發(fā)生改變的病人前后兩次結(jié)核分枝桿菌菌株基因型比較分析，探討耐藥的產(chǎn)生原因。 材料和方法:實驗所用菌株來源于上海市疾病預防控制中心參比實驗室菌株庫保存的上海地區(qū)結(jié)核病患者分離菌株。選擇保存

2、有不同時間分離的標本且兩次結(jié)核分枝桿菌耐藥表型不同的病例作為研究對象。菌種鑒定方法按照《結(jié)核病診斷細菌學檢驗規(guī)程》進行。藥敏試驗方法按照《結(jié)核病診斷細菌學檢驗規(guī)程》中絕對濃度法進行。結(jié)核分枝桿菌散在分布重復單位(mycobacterial interspersedrepetitive units，MIRU)基因型分型技術參考沈國妙等的方法。結(jié)核分枝桿菌IS6110限制性片段長度多態(tài)性分析(IS6110—RFLP)基因型的鑒定參考D．va

3、n Soolingen等的方法。 實驗結(jié)果: 1．入選病例基本情況：根據(jù)上海市疾病控制中心參比實驗室數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計資料，上海市1999年到2004年底收集保留新發(fā)結(jié)核病人的菌株共6622株，其中其中同一患者保留有兩次以上菌株的有322例，前后兩次菌株耐藥表型發(fā)生改變的有100例，對這100例患者的菌株進行活化，由于有些患者的一個菌株丟失或活化失敗，最終獲得了有前后兩次菌株的38個病例，76個菌株。 2．通過比較同一患

4、者治療前后菌株基因型的差異，結(jié)合耐藥表型的變化，判斷耐藥的產(chǎn)生原因。如果前后菌株的MIRU和IS6110基因型均相同，耐藥表型發(fā)生改變，被認為是獲得性耐藥；如果MIRU或IS6110基因型不同，耐藥表型發(fā)生改變的認為是原發(fā)性耐藥。我們鑒定了所有患者前后兩次菌株的MIRU基因型，對前后兩次MIRU基因型相同的菌株，進一步鑒定其IS6110—RFLP基因型。結(jié)果顯示，在38例耐藥表型發(fā)生改變的病例中，前后兩次菌株MIRU或IS6110—RF

5、L基因型不同的共33例，MIRU和IS6110—RFLP基因型均相同的只有5例。這提示耐藥表型的變化主要是再感染或多重感染了不同的菌株所致。為了研究耐藥產(chǎn)生的原因，我們排除了6例由耐藥變?yōu)槊舾械牟±?。?2例由敏感變?yōu)槟退幍牟±校?7例的菌株基因型發(fā)生改變，為原發(fā)性耐藥(84.4％，27/32)，5例基因型相同，為獲得性耐藥(15.6％，5/32)。 結(jié)論:有治療史的結(jié)核病患者產(chǎn)生的耐藥中84.4％為原發(fā)性耐藥。這些結(jié)果說明在