RRM1在急性白血病中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景和目的
　　 急性白血病是一類造血干、祖細(xì)胞來源的惡性克隆性血液系統(tǒng)疾病。急性白血病細(xì)胞對化療藥物耐藥并復(fù)發(fā)是導(dǎo)致患者治療失敗的主要因?yàn)橹?探討其耐藥機(jī)制一直是臨床醫(yī)療活動中最為重要的課題。白血病細(xì)胞DNA的修復(fù)異常及其相關(guān)基因的表達(dá)異常與化療耐藥有密切關(guān)系,因此,尋找并鑒定這類分子標(biāo)志物可以指導(dǎo)臨床制定合理的化療方案,提高療效,實(shí)現(xiàn)個體化治療。其中,核糖核苷酸還原酶M1(ribonucleotide reductase

2、subunit,RRM1)是目前研究較多的一個基因,作為核糖核苷酸還原酶其中的一個亞單位,在非小細(xì)胞肺癌和胰腺癌等實(shí)體瘤中,發(fā)現(xiàn)它的表達(dá)高低與吉西他濱耐藥有關(guān),影響療效,因此RRM1在判斷患者預(yù)后方面也有重要的作用。國內(nèi)外對于RRM1的研究多集中在實(shí)體瘤,在急性白血病中的研究甚少,僅通過基因陣列技術(shù)在難治性急性髓系白血病M2a的基因表達(dá)譜中發(fā)現(xiàn)RRM1表達(dá)明顯上調(diào),其意義有待進(jìn)一步探討。本文通過RT-PCR方法檢測急性白血病患者骨髓單個

3、核細(xì)胞中RRM1mRNA的表達(dá)水平,并通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究了RRM1 mRNA表達(dá)水平與阿糖胞苷及吉西他濱體外對細(xì)胞凋亡的相關(guān)性；通過對患者的隨訪,分析RRM1mRNA表達(dá)與療效及預(yù)后的關(guān)系。
　　 材料與方法
　　 1.研究對象
　　 急性白血病患者38例均為鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科2009年3月至2009年6月住院的初治病例。所有患者經(jīng)過血常規(guī)、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)檢查,符合急性

4、白血病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。男性20例,女性18例,中位年齡36歲(16-63歲)。其中AML22例(M29例,M38例,M55例),ALL16例(B-ALL9例,T-ALL7例)。對照組為同期血液科非惡性血液病患者10例,其中男4例,女6例,中位年齡38歲(21歲-57歲)。
　　 2.RT-PCR
　　 分離單個核細(xì)胞,TRIZOL法提取細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,后PCR擴(kuò)增25個循環(huán)。電泳后,紫外燈下照相,所有陽性結(jié)果

5、進(jìn)行灰度分析并計(jì)算RRM1/β-actin的比值。
　　 3.細(xì)胞凋亡測定
　　 收集單個核細(xì)胞后,加入吉西他濱、阿糖胞苷藥物后在37℃、5％CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時,用流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡。
　　 4.隨訪
　　 對38例急性白血病患者隨訪,觀察化療療效及生存情況。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±

6、SD)或中位數(shù)(M)表示,計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn),兩樣本均數(shù)的比較采用獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),多樣本均數(shù)的比較采用方差分析。采用Kaplan-Meier,進(jìn)行生存分析,用Log-rank檢驗(yàn)差異性。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.RRM1 mRNA在初治急性白血病中的表達(dá)
　　 38例初治急性白血病患者中,22例患者骨髓單個核細(xì)胞表達(dá)RRM1 mRNA,陽性率為57.9％,對照組陽性率為20.0％(

7、2/10),兩者之間的差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.RRM1 mRNA在不同類型急性白血病中的表達(dá)
　　 在22例AML患者中13例患者骨髓單個核細(xì)胞表達(dá)RRM1 mRNA,陽性率為50.9％,而在16例ALL中,陽性率為56.3％,兩者之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.急性白血病細(xì)胞RRM1 mRNA表達(dá)水平與藥物誘導(dǎo)凋亡的關(guān)系
　　 以RRM1 mRNA表達(dá)量(相

8、對于β-actin)的中位數(shù)為界,分為低表達(dá)組和高表達(dá)組?；颊吖撬鑶蝹€核細(xì)胞分別經(jīng)阿糖胞苷組和吉西他濱處理24小時后,均可檢測到細(xì)胞凋亡,且顯著高于對照組(P＜0.05)；而RRM1 mRNA高表達(dá)組的藥物誘導(dǎo)的單個核細(xì)胞的凋亡率(阿糖胞苷8.07±0.97％,吉西他濱8.32±1.14％)均顯著低于RRM1 mRNA低表達(dá)組者(阿糖胞苷31.97±3.14％,吉西他濱33.58±4.19％),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

9、　　 4.RRM1 mRNA表達(dá)與臨床特征的關(guān)系
　　 RRM1 mRNA的表達(dá)在性別、年齡、骨髓原始細(xì)胞數(shù)及髓外浸潤方面的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),與這些臨床特征沒有相關(guān)性。
　　 5.RRM1 mRNA與白血病患者治療效果的相關(guān)分析
　　 在AML-M3之外的其它類型白血病中,RRM1 mRNA高表達(dá)的患者的中位生存期短于低表達(dá)組,它們之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而AML-M3患者的中位生