Cyclin H、CDK7在急性白血病中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：細(xì)胞周期素(cyclins)是一種細(xì)胞周期調(diào)控子，其表達(dá)水平隨細(xì)胞周期各時(shí)相的轉(zhuǎn)換而改變。不同的cyclins在不同時(shí)期通過(guò)與相應(yīng)的周期素依賴性激酶(CDK)結(jié)合和分離，導(dǎo)致其底物磷酸化及去磷酸化，對(duì)細(xì)胞周期的各階段進(jìn)行調(diào)控。cyclin H與其他cyclins所不同的是，cyclin H的表達(dá)在整個(gè)細(xì)胞周期過(guò)程中不呈周期性變化。cyclin H是一種新的細(xì)胞周期素，可以增強(qiáng)CDK7的磷酸化功能并激活其他CDKs。因此，人們推測(cè)，

2、CDK7/cyclin H復(fù)合物極有可能是細(xì)胞周期CDK/cyclins級(jí)聯(lián)反應(yīng)進(jìn)程中的上游元件。目前的研究資料顯示：cyclin H、CDK7在腫瘤組織中的表達(dá)水平明顯高于非腫瘤組織，其過(guò)度表達(dá)可催化CDK分子的異?；罨?，導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)度增殖。故此，可將它作為一種新的增殖指標(biāo)對(duì)指導(dǎo)臨床化療及判斷腫瘤轉(zhuǎn)歸及預(yù)后有重要意義?，F(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外學(xué)者大多涉及實(shí)體瘤(如胃癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、惡性黑色素瘤等)的研究，關(guān)于在白血病中的研究資料很少，國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)

3、報(bào)道。本研究旨在檢測(cè)CDK7/cyclin HmRNA在白血病中表達(dá)并分析其臨床意義。希望為探討白血病的發(fā)病機(jī)制、判斷療效及指導(dǎo)治療有幫助。 方法：研究對(duì)象為101例急性白血病(AL)患者(其中包括69例初治患者、13例復(fù)發(fā)患者和19例持續(xù)完全緩解期患者)，15名健康人做正常對(duì)照。應(yīng)用半定量RT-PCR方法檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞cyclin H、 CDK7 mRNA表達(dá)水平及P53、cyclin E2、CDK2 mRNA表達(dá)水平。

4、 結(jié)果： 1 在白血病細(xì)胞株HL60、K562中cyclin H mRNA均呈陽(yáng)性表達(dá)。在AL患者中，69例初治組患者陽(yáng)性率為66.7％(46/69)，表達(dá)水平為(0.9100±0.6559)；13例復(fù)發(fā)組患者陽(yáng)性率為76.9％(10/13)，表達(dá)水平為(0.9600±0.5045)；19例緩解組患者陽(yáng)性率為36.8％(7/19)，表達(dá)水平為(0.5505±0.2663)；而用同一實(shí)驗(yàn)條件在15名正常人中僅有3例呈陽(yáng)性表達(dá)

5、，陽(yáng)性率為20％，表達(dá)水平為(0.3420±0.2352)。初治組和復(fù)發(fā)組陽(yáng)性率和表達(dá)水平明顯高于緩解組和正常對(duì)照組(P<0.05)；其中初治組和復(fù)發(fā)組陽(yáng)性率和表達(dá)水平比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，緩解組和對(duì)照組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對(duì)69例初治AL患者進(jìn)行療效評(píng)估，45例獲得CR，CR.率為65.2％。其中cyclin HhaRNA陽(yáng)性表達(dá)的AL患者其CR率(56.5％)明顯低于cyclin H陰性表達(dá)者的CR率(

6、82.6％)，(x<'2>=4.600，P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)緩解的45例患者追蹤隨訪，其中39例可進(jìn)行臨床評(píng)估，持續(xù)緩解31例，復(fù)發(fā)8例。在8例復(fù)發(fā)患者中6例cyclin HmRNA為陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)組的復(fù)發(fā)率(6/42，14.3％)高于陰性表達(dá)組的復(fù)發(fā)率(2/21，9.5％)，卡方分析(x<'2>=0.286，P>0.05)，差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與觀察時(shí)間較短，復(fù)發(fā)例數(shù)少有關(guān)系，尚需進(jìn)一步隨訪觀察。 2 在

7、白血病細(xì)胞株HL60、K562中CDK7 mRNA均呈陽(yáng)性表達(dá)。在AL患者中，初治組患者陽(yáng)性率為65.2％(45/69)，表達(dá)水平為(1.0612±0.5786)；13例復(fù)發(fā)組患者陽(yáng)性率為84.6％(11/13)，表達(dá)水平為(1.1908±0.6863)；19例緩解組患者陽(yáng)性率為36.8％(7/19)，表達(dá)水平為(0.7532±0.1738)；而用同一實(shí)驗(yàn)條件在15名正常人中僅有3例呈陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為20％，表達(dá)水平為(0.6453±

8、0.2523)。初治組和復(fù)發(fā)組陽(yáng)性率和表達(dá)水平明顯高于緩解組和正常對(duì)照組(P<0.05)；其中初治組和復(fù)發(fā)組陽(yáng)性率和表達(dá)水平比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，緩解組和對(duì)照組比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對(duì)69例初治白血病患者進(jìn)行療效評(píng)估，其中45獲得CR，CR率為65.2％。其中CDK7 mRNA陽(yáng)性表達(dá)的AL患者其CR率(55.6％)明顯低于CDK7陰性表達(dá)者的CR率(83.3％)，(x<'2>=5.324，P<0.05)，有

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)緩解的45例患者追蹤隨訪，其中39例可進(jìn)行臨床評(píng)估，持續(xù)緩解31例，復(fù)發(fā)8例。在8例復(fù)發(fā)患者中6例CDK7 mRNA為陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)組的復(fù)發(fā)率為(6/41，14.6％)高于陰性表達(dá)組的復(fù)發(fā)率(2/22，9.1％)，卡方分析(x<'2>=0.397，P>0.05)，差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這可能與觀察時(shí)間較短，復(fù)發(fā)例數(shù)少有關(guān)系，尚需進(jìn)一步隨訪觀察。 3 在所同時(shí)檢測(cè)69例AL患者中，一用pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)cy

10、clin H mRNA與CDK7 mRNA之間有相關(guān)性(r=0.388，P=0.009)。我們同時(shí)檢測(cè)了35例cyclin H、CDK7 mRNA同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的AL緩解率為51.4％，同時(shí)陰性表達(dá)緩解率為92.3％。兩者同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)組緩解率明顯低于同時(shí)陰性表達(dá)組緩解率，且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x<'2>=6.759，P<0.05)，也低于單一陽(yáng)性表達(dá)組。 4 cyclin H、CDK7 mRNA的表達(dá)與AL患者臨床一般資料之間的關(guān)系

11、。在性別、年齡、白細(xì)胞計(jì)數(shù)之間陽(yáng)性率和表達(dá)水平無(wú)顯著性差異(P>0.05)；M2、M3、M4、M5、L2各亞型間cyclin H mRNA.表達(dá)水平有差別，M3中表達(dá)水平最高，但各亞型間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均大于0.05)。CDK7 mRNA在L2中表達(dá)水平最高，但各亞型間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均大于0.05)。 5 cyclin H、CDK7與其他細(xì)胞周期調(diào)控因子之間的關(guān)系。在AL患者中，CDK7/cyclin H與CDK2/cyc

12、lin E2無(wú)相關(guān)關(guān)系(P>0.05)，可能主要是在活性方面的調(diào)節(jié)；cyclin H、CDK7與P53在mRNA水平上僅有負(fù)相關(guān)趨勢(shì)而無(wú)明顯的相關(guān)關(guān)系(r=-0.122，r=-0.175，P>0.05)。P53是CAK酶的作用底物，可能主要是活性方面的調(diào)節(jié)。 結(jié)論： 1 cyclin H、CDK7在AL患者初治組和復(fù)發(fā)組中的陽(yáng)性率和mRNA表達(dá)水平明顯高于持續(xù)緩解組和正常對(duì)照組。陽(yáng)性表達(dá)的AL患者緩解率低，易復(fù)發(fā)，治療效

13、果差。提示cyclinH、CDK7參與AL的發(fā)生與發(fā)展，陽(yáng)性表達(dá)是AL預(yù)后不良指標(biāo)。 2 在AL患者中，cyclin H與CDK7有正相關(guān)關(guān)系。兩者同時(shí)陽(yáng)性表達(dá)的患者緩解率低于單一陽(yáng)性表達(dá)患者，均比陰性表達(dá)患者緩解率低。提示兩者在白血病發(fā)病機(jī)制中可能作為復(fù)合體起協(xié)同作用。 3 在AL患者中，CDK7/cyclin H與CDK2/cyclin E2無(wú)相關(guān)關(guān)系。推測(cè)，CDK7/cyclin H可能在磷酸化CDK2/cycli

14、n E2中起主要作用，而不是提高它的基因和蛋白水平，CDK7/cyclin H的升高使CDK2/cyclin E2的活性增加了，驅(qū)使細(xì)胞超越G1/S期限制點(diǎn)而導(dǎo)致細(xì)胞周期縮短、細(xì)胞增殖增加，從而在白血病的發(fā)生中起重要作用。 4 在AL患者中，cyclin H、CDK7與P53在mRNA水平上僅有負(fù)相關(guān)趨勢(shì)而無(wú)明顯的相關(guān)關(guān)系。P53是CAK酶的作用底物，在P53激活的條件下，CAK活性的下降僅僅由于功能性P53的存在，而與P53數(shù)量的關(guān)系