Axl及其配體蛋白Gas6在急性白血病中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、背景：急性白血病(acute leukemia,AL)是對(duì)化療敏感的疾病之一,近年來隨著治療藥物和手段不斷完善和發(fā)展,白血病患者完全緩解率有所提高。然而,化療后白血病細(xì)胞多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)的產(chǎn)生仍是制約白血病治療進(jìn)展最主要的因素。Axl是受體酪氨酸激酶家族中的一員,作為一種轉(zhuǎn)化基因最初發(fā)現(xiàn)于慢性粒細(xì)胞白血病和骨髓增殖性疾病中,該基因定位于19q13.1,是大小約140×103大小的跨膜分子。它在

2、多種腫瘤如肺癌、結(jié)腸癌、食管癌、卵巢癌等腫瘤組織中均異常高表達(dá)。Gas6,Axl受體酪氨酸激酶的生物配體,因其最先發(fā)現(xiàn)在生長停滯細(xì)胞高表達(dá)而得名,編碼生長停滯特異性基因6(Growth arrest-specitic gene6,Gas6)。近年來研究發(fā)現(xiàn)Ax1與配體Gas6結(jié)合后,可激活自身的酪氨酸激酶活性,并激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,在細(xì)胞增殖、粘附、細(xì)胞轉(zhuǎn)化及抗凋亡中有一定的作用。并在關(guān)于Gas6-Ax1與白血病細(xì)胞株的體外研究中,發(fā)

3、現(xiàn)Gas6-Ax1可激活PI3K/Akt和Raf/MEK/ERK信號(hào)通路,引起B(yǎng)cl-2、Bcl-xL及Twist下游區(qū)域的分子改變,從而導(dǎo)致白血病細(xì)胞多藥耐藥的發(fā)生。目前有關(guān)Gas6-Ax1在急性白血病患者中的表達(dá)情況及其與多藥耐藥的關(guān)系報(bào)道甚少。Gas6-Ax1在AL中的異常表達(dá),可望成為檢測AL病情變化、判斷預(yù)后、指導(dǎo)治療的分子生物學(xué)標(biāo)記物及治療新的靶點(diǎn)。
　　 目的：檢測74例成人AL患者和12例對(duì)照者的骨髓細(xì)胞Ax1、

4、Gas6mRNA的表達(dá)水平,同時(shí)檢測Bcl-2 mRNA的表達(dá)水平,旨在探討Gas6-Ax1在白血病發(fā)生、發(fā)展中的作用及其與多藥耐藥的關(guān)系。
　　 方法：
　　 1.采用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法,檢測47例初治、27例復(fù)發(fā)難治成人急性白血病(包括AML和ALL)患者及12例正常對(duì)照者骨髓單個(gè)核細(xì)胞Ax1、Gas6mRNA及Bcl-2 mRNA的表達(dá)水平。
　　 2.采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0進(jìn)行分析,實(shí)時(shí)定量

5、資料屬于非正態(tài)計(jì)量資料,數(shù)據(jù)用中位數(shù)和四分位數(shù)(Median±Quartiles)表示,多組間Ax1、Gas6、Bcl-2 mRNA表達(dá)水平的比較采用kruskal-wallis檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義再進(jìn)行兩組間比較,兩組間比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.AML患者Ax1與Gas6 mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性分析采用Spearman非參數(shù)相關(guān)分析,P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。<

6、br>　　 4.AML患者Ax1與Bcl-2 mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性分析采用Spearman非參數(shù)相關(guān)分析,P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5.將初治AML患者按化療效果分為完全緩解組(CR)和未完全緩解組(包括PR和NR),用Mann-Whitney U檢驗(yàn)比較兩組間Ax1、Gas6 mRNA的表達(dá)水平。
　　 6.用Spearman非參數(shù)相關(guān)分析Ax1 mRNA與初治AML患者性別、年齡、初診時(shí)白細(xì)胞數(shù)及C

7、D34抗原表達(dá)的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1.對(duì)照組與AL各組中Ax1 mRNA的表達(dá):Ax1 mRNA在ALL患者中的中位表達(dá)水平與對(duì)照組比較無明顯差異性(Z=-1.603,P＞0.05),而在AML患者中的中位表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(Z=-2.800,P=0.005),也高于ALL組(Z=-3,234,P=0.001)。初治AML組及復(fù)發(fā)/難治AML組Ax1 mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組(Z分別為-2.124、-

8、3.331,P值均＜0.05);復(fù)發(fā)/難治AML組Ax1 mRNA表達(dá)水平明顯高于初治AML組Ax1mRNA表達(dá)水平(Z=-2.581,P＜0.05)。
　　 2.對(duì)照組與AL各組中Gas6 mRNA的表達(dá):Gas6 mRNA在AML患者、ALL患者中的中位表達(dá)水平均高于對(duì)照組(Z=-3.621、-2.121,P均＜0.05),但在AML患者中的中位表達(dá)水平明顯高于ALL患者(Z=-2.347,P＜0.05)。初治ALL組與復(fù)發(fā)

9、/難治ALL組Gas6 mRNA的表達(dá)水平均高于對(duì)照組(Z分別為-3.030、-3.216,P均＜0.05),而其在初治ALL組與復(fù)發(fā)/難治ALL組之間比較無明顯差異(Z=-0.707,P＞0.05)。初治AML組及復(fù)發(fā)/難治AML組Gas6 mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組(Z分別為-3.180、-3.593,P均＜0.05);復(fù)發(fā)/難治AML組Gas6 mRNA表達(dá)水平明顯高于初治AML組Gas6 mRNA表達(dá)水平(Z=-2.414,P

10、=0.017)。
　　 3.對(duì)照組與AL各組中Bcl-2 mRNA的表達(dá):Bcl-2 mRNA在AML患者、ALL患者中的中位表達(dá)水平均高于對(duì)照組(Z=-3.145、-2.489,P均＜0.05),但在ALL患者中的中位表達(dá)水平明顯高于AML患者(Z=-2.421,P＜0.05)。初治ALL組及復(fù)發(fā)/難治ALL組Bcl-2 mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組(Z分別為-2.310、-3.306,P均＜0.05);復(fù)發(fā)/難治ALL組Bc

11、l-2 mRNA表達(dá)水平明顯高于初治ALL組Bcl-2 mRNA表達(dá)水平(Z=-2.179,P=0.030)。初治AML組及復(fù)發(fā)/難治AML組Bcl-2 mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組(Z分別為-2.657、-3.044,P均＜0.05);復(fù)發(fā)/難治AML組Bcl-2mRNA表達(dá)水平明顯高于初治AML組Bcl-2 mRNA表達(dá)水平(Z=-2.037,P=0.042)。
　　 4.AML患者Ax1與Gas6 mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性

12、分析:在AML患者中Ax1和Gas6 mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.514,P＜0.01)。
　　 5.AML患者Ax1與Bcl-2 mRNA表達(dá)水平的相關(guān)性分析:在AML患者中Ax1和Bcl-2 mRNA的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.613,P＜0.01)。
　　 6.Ax1、Gas6 mRNA的表達(dá)水平與臨床療效的關(guān)系:初治AML患者共38例,完全緩解組骨髓單個(gè)核細(xì)胞Ax1、Gas6 mRNA中位表達(dá)水平分別為(

13、0.6147、0.3218),均明顯低于未完全緩解組(17.2301、10.5185),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z分別為-2.507、-2.379,P均＜0.05)。
　　 7.Ax1 mRNA表達(dá)與AML病程關(guān)系的觀察:本研究隨訪了4例初治AML患者,其中例1、例2患者化療前Ax1 mRNA水平較高表達(dá),其表達(dá)水平分別為9.1452、3.3427,化療后Ax1 mRNA水平轉(zhuǎn)為低表達(dá),均＜0.3351,處于持續(xù)血液學(xué)CR狀態(tài),動(dòng)態(tài)

14、監(jiān)測Ax1 mRNA水平3次,未見Ax1 mRNA增高;例3患者經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)方案誘導(dǎo)2個(gè)療程、FLAG方案誘導(dǎo)2個(gè)療程后仍未緩解,隨訪8個(gè)月,動(dòng)態(tài)監(jiān)測Ax1 mRNA表達(dá)5次,Ax1 mRNA表達(dá)持續(xù)高水平(均高于26.3157),患者最終因治療無效而死亡。例4為AML-M4患者,常規(guī)化療后獲完全緩解,期間動(dòng)態(tài)監(jiān)測Ax1 mRNA共4次,表達(dá)水平漸降低,均低于4.3721,于治療第7個(gè)月監(jiān)測Ax1 mRNA的表達(dá)水平發(fā)現(xiàn)其明顯增高,為32.4

15、781,該患者于1個(gè)月后發(fā)生了血液學(xué)復(fù)發(fā)。提示Ax1再次升高預(yù)示復(fù)發(fā)。
　　 8.Ax1 mRNA的表達(dá)與初治AML患者臨床特征的關(guān)系:Ax1 mRNA表達(dá)水平與初治AML患者性別、年齡、初診時(shí)白細(xì)胞數(shù)及CD34抗原表達(dá)的相關(guān)性分析結(jié)果顯示:Ax1 mRNA表達(dá)水平與上述指標(biāo)均無相關(guān)性(P均＞0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.與正常對(duì)照組相比,ALL患者Ax1的表達(dá)水平無明顯差異,推測Ax1的表達(dá)可能與ALL

16、的發(fā)生和進(jìn)展無關(guān)。
　　 2.Ax1、Gas6的表達(dá)水平在對(duì)照組、初治AML組及復(fù)發(fā)/難治AML組均呈現(xiàn)由低到高的上升趨勢(shì),且兩種基因的表達(dá)水平呈正相關(guān)。提示Gas6-Ax1可能與AML的發(fā)生、發(fā)展及多藥耐藥的發(fā)生密切相關(guān)。
　　 3.與正常對(duì)照組相比,Bcl-2在AML、ALL中的表達(dá)均存在較高水平,提示Bcl-2的過度表達(dá)可能參與了AL的發(fā)生。且ALL組Bcl-2的表達(dá)水平均高于AML組,解釋了ALL患者緩解率低、復(fù)

17、發(fā)率高的原因。
　　 4.AML患者中Ax1和Bcl-2的表達(dá)呈正相關(guān),提示Gas6-Ax1和Bcl-2共同參與了AML的發(fā)生、發(fā)展及多藥耐藥的發(fā)生。而Gas6-Ax1通過何種途徑影響B(tài)cl-2的表達(dá)及其內(nèi)在的信息轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。
　　 5.Ax1、Gas6的過表達(dá)會(huì)導(dǎo)致AML患者臨床緩解率降低,是引起急性白血病療效差和預(yù)后不良的重要因素。
　　 6.治療前Ax1高表達(dá)的AML患者獲誘導(dǎo)緩解后長期無病生存

18、時(shí),Ax1的表達(dá)水平較低:未能獲完全緩解者,Ax1的表達(dá)可持續(xù)高水平;獲得完全緩解的AML患者復(fù)發(fā)前,出現(xiàn)Ax1表達(dá)水平的降低后再次升高。因此認(rèn)為通過檢測AML患者Ax1的表達(dá)水平,可以檢測AML化療后體內(nèi)微小殘留病狀況,并可提前發(fā)現(xiàn)髓系白血病分子生物學(xué)復(fù)發(fā),對(duì)發(fā)現(xiàn)AML的早期復(fù)發(fā)及預(yù)后有一定意義。
　　 7.Ax1的表達(dá)與AML患者初診時(shí)性別、年齡、初診時(shí)白細(xì)胞數(shù)、染色體核型及CD34抗原表達(dá)無明顯相關(guān)性,說明Ax1是獨(dú)立于這