miR-215和miR-218在急性髓系白血病中的表達及其臨床意義的研究.pdf

1、目的：
　　本研究擬通過實時定量PCR(RQ-PCR)的方法，對急性髓系白血病(acutemyeloid leukemia，AML)患者骨髓中的微小RNA-215(microRNA-215，miR-215)和微小RNA-218(microRNA-218，miR-218)的表達進行相關(guān)檢測，并通過分析miR-215和miR-218在AML患者和正常人骨髓單個核細胞中表達情況的差異對其臨床意義進行探討。
　　方法：
　　1

2、、研究對象:miR-215的檢測中共收集70例AML患者骨髓標本，對照組為16例正常人骨髓標本。miR-218的檢測中共收集71例AML患者骨髓標本，對照組為14例正常人骨髓標本。
　　2、設(shè)計與合成引物:參照相關(guān)文獻，采用Premier Primer5軟件進行miR-215和miR-218及內(nèi)參U6基因的引物設(shè)計。
　　3、對各研究對象的骨髓單個核細胞進行分離，并對細胞中的總RNA進行提取，然后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄過程將cDNA合成，

3、進行RQ-PCR，對miR-215和miR-218的表達進行檢測得到Ct值，分析測定△Ct值。△Ct值=目的基因Ct值-內(nèi)參基因Ct值。
　　4、分別對miR-215和miR-218的測定結(jié)果與患者臨床資料進行分析。
　　5、對所得到的實驗數(shù)據(jù)進行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1、總RNA純度分析:通過紫外分光光度計對所提取的總RNA進行分析檢測，結(jié)果顯示大部分OD260/280的比值分布在1.8-2.2之間

4、，純度較高。
　　2、U6內(nèi)參基因和目的基因經(jīng)擴增后生成熔解曲線，曲線呈單一、銳利的峰表明擴增產(chǎn)物沒有產(chǎn)生明顯的引物二聚體，沒有出現(xiàn)非特異性擴增現(xiàn)象，產(chǎn)物較均一。用2％濃度的瓊脂糖凝膠對擴增產(chǎn)物進行電泳分析，觀察擴增片段呈單一條帶，說明沒有非特異性擴增出現(xiàn)和引物二聚體產(chǎn)生。
　　3、AML患者中miR-215和miR-218的表達水平顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。
　　4、AML患者中miR-21

5、5表達與患者的年齡、性別、血紅蛋白含量、PLT計數(shù)、FAB分組和核型分析之間無相關(guān)性(P＞0.05)，但與白細胞計數(shù)有關(guān)，低表達組的WBC計數(shù)明顯高于高表達組(P＜0.05); miR-215低表達組患者的NPM1基因突變率高于高表達組患者(P=0.008)，其余9種基因突變無相關(guān)性。
　　5、AML患者中miR-218表達與患者的年齡、性別、WBC、Hb含量、PLT計數(shù)、FAB分組和核型分析、10種基因突變之間無相關(guān)性(P＞0.