游離脂肪酸對大鼠血壓和心功能的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分代謝綜合征大鼠模型的建立及心功能損害的機(jī)制研究
　　 目的：
　　 1.建立高脂飼養(yǎng)SD大鼠MS的動物模型。
　　 2.觀察此模型MS各組分的特點(diǎn)。
　　 3.應(yīng)用心臟形態(tài)學(xué)和超聲心動圖評價MS大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化。
　　 4.研究MS大鼠心功能損害的機(jī)制。
　　 方法：
　　 8周齡雄性Sprague-Dawlep(SD)大鼠92只，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字分為兩組：正常對照組(

2、NC組)n=32只，代謝綜合征組(MS組)n=60只。NC組以大鼠普通飼料飼養(yǎng)，MS組以高脂飼料飼養(yǎng)，24周后，截尾法取血測定胰島素、甘油三酯、游離脂肪酸、醛固酮和血管緊張素Ⅱ，取MS組12只，NC組8只大鼠，行動靜脈插管術(shù)并應(yīng)用正常血糖高胰島素鉗夾術(shù)評價胰島素敏感性，應(yīng)用多導(dǎo)生理記錄儀評價大鼠心功能后處死動物，取大鼠心肌組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并測定心肌TG含量和內(nèi)臟脂肪重量。實(shí)驗(yàn)過程中觀察以下指標(biāo)：①各組大鼠每周測量體重、血糖及應(yīng)用單通道自動

3、無創(chuàng)血壓測試系統(tǒng)測量尾動脈血壓一次。②實(shí)驗(yàn)?zāi)?，兩組各取12只大鼠行IPGTT實(shí)驗(yàn)。③實(shí)驗(yàn)?zāi)﹥山M各取12只大鼠行超聲心動圖檢查。④應(yīng)用苦味酸天狼猩紅染色和偏振光檢查觀察心肌組織。⑤免疫組織化學(xué)檢測血管緊張素原Ⅱ、血管緊張素Ⅱ1型受體和血管緊張素Ⅱ2型受體在大鼠心肌組織中的表達(dá)。⑥實(shí)時熒光定量PCR檢測心臟組織中腎素、血管緊張素原Ⅱ、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶和血管緊張素Ⅱ1型受體、血管緊張素Ⅱ2型受體mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　

4、 1.大鼠體重、血壓和內(nèi)臟脂肪含量
　　 飼養(yǎng)至第24周時，與NC組相比，MS組不但體重增加了31.5％(P<0.01)，且出現(xiàn)了典型的腹型肥胖，內(nèi)臟脂肪重量占體重的百分比明顯增高(10.6％±2.7％vs5.1％±1.1％，P<0.01)。MS組大鼠收縮壓也有明顯升高(155.4±6.6 mmHgvs.132.1±5.3mmHg，P<0.01)。
　　 2大鼠空腹血糖、胰島素、FFA、IPGTT、正常血糖高胰島素鉗夾

5、試驗(yàn)結(jié)果
　　 24周后，MS組大鼠空腹血糖水平明顯升高，但未達(dá)到糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，MS組空腹血糖、胰島素、FFA、TG分別比NC組升高了19.3％(P<0.05)、300％(P<0.01)、105％(P<0.01)和43.75％(P<0.01)。
　　 MS組大鼠早時相胰島素分泌功能受損，胰島素分泌高峰延遲。腹腔注射糖耐量受損，腹腔糖耐量試驗(yàn)在120min時血糖有顯著性差異(P<0.05)。MS組大鼠較NC組GIR顯著

6、降低(P<0.01)。
　　 3.心功能
　　 3.1左心室重量指數(shù)
　　 與NC組比較，MS組大鼠左心室重量指數(shù)明顯增大(P<0.01)。
　　 3.2多普勒超聲心動評價二組大鼠心臟功能的變化
　　 (1)MS組與NC組相比，大鼠左室心腔擴(kuò)大，室壁增厚，左室舒張末期徑(LVDd)和收縮末期內(nèi)徑(LNDs)明顯增加。
　　 (2)與NC比較，MS組左心室后壁收縮末期厚度(Ts)、左心室后壁

7、舒張末期厚度(Td)明顯均增加(P<0.01)；射血分?jǐn)?shù)(EF)、短軸縮短率(FS)、心指數(shù)(CI)顯著降低，分別降低了10.6％、49.5％和19.8％(P<0.01)，而二組室壁收縮增厚率(△T％)、心率(HR)沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 3.3 MS組的左室最大收縮速率(+dp/dtmax)和左室最大舒張速率(-dp/dtmax)較NC組分別降低了約30％(P<0.01)。
　　 4心肌TG含量

8、　　 與NC組相比，MS組大鼠心肌TG含量明顯增加(P<0.01)。
　　 提示：MS大鼠存在心肌TG異位沉積。
　　 5組織病理改變
　　 心臟狼紅染色顯示，NC組心肌形態(tài)正常，肌纖維排列規(guī)整：壁內(nèi)小動脈管腔和管壁的比例正常，在偏振光顯微鏡下觀察可見膠原纖維少量增生，以Ⅲ型膠原纖維為主。MS組心肌細(xì)胞肥大，排列紊亂，壁內(nèi)小動脈管壁增厚，管腔狹窄，在偏振光顯微鏡下觀察可見有大量的膠原纖維圍繞心肌細(xì)胞，以Ⅰ型膠原

9、纖維為主，膠原纖維網(wǎng)斷裂、排列紊亂。
　　 6 RAAS系統(tǒng)研究
　　 6.1血清學(xué)水平比較
　　 MS組大鼠血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)水平較NC組分別增加了124％和40.64％4(P<0.01)。
　　 6.2免疫組織化學(xué)檢測
　　 和NC組相比，MS組AngⅡ和AT1的表達(dá)明顯增強(qiáng)，胞漿中棕黃色目標(biāo)染色明顯增強(qiáng)，IOD值明顯升高(均P<0.01)。MS組AT2的表達(dá)明顯減弱，

10、胞漿中棕黃色目標(biāo)染色明顯減弱，IOD明顯降低(P<0.01)。
　　 6.3 Real-timePCR檢測mRNA表達(dá)
　　 和NC組比較，MS組心肌組織AngⅡ和ACEmRNA表達(dá)分別增加133.6％(P<0.01)和102.8％(P<0.01)，Renin mRNA表達(dá)增高27.4％(P<0.05)，AT1 mRNA表達(dá)增高7.4％(P>0.05)，AT2mRNA表達(dá)降低71.4％(P<0.01)。
　　 相

11、關(guān)性分析顯示心肌TG含量與AngⅡ mRNA呈正相關(guān)(r=0.467，P<0.05)，而與AT2 mRNA呈負(fù)相關(guān)(r=-0.376，P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1本課題全部選用雄性SD大鼠，應(yīng)用以豬油為主要成分制備高脂飼料，選用飼養(yǎng)24周作為干預(yù)時間，成功的構(gòu)建了與人類MS具有高度相似性的MS大鼠模型，并深入的研究了MS各組分的特點(diǎn)。
　　 2應(yīng)用心臟形態(tài)學(xué)和超聲心動圖結(jié)果顯示MS大鼠出現(xiàn)心臟收縮和舒

12、張功能受損。
　　 3在血清學(xué)、分子生物學(xué)和免疫組織化學(xué)的水平上證實(shí)MS大鼠心功能受損的機(jī)制與心肌TG異位沉積引起心肌局部RAAS的激活有關(guān)。
　　 第二部分吡格列酮對代謝綜合征大鼠血壓和心功能的影響
　　 目的：
　　 1.觀察吡格列酮能否降低高脂誘導(dǎo)MS大鼠的代謝性高血壓及其可能的機(jī)制。
　　 2.用心臟形態(tài)學(xué)和超聲心動圖檢測吡格列酮干預(yù)后MS大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化，評價吡格列酮對MS大鼠的

13、心功能是否有保護(hù)作用。
　　 方法：
　　 第一部分的實(shí)驗(yàn)動物經(jīng)干預(yù)24周后，進(jìn)入本部分的大鼠有：NC組19只，分為NC組(正常對照組，11只)，NP組(普通飼料加吡格列酮10mg.kg-1d-1灌胃組，8只)；MS組大鼠分為MC組(高脂飼料加生理鹽水灌胃組，6只)，MP組(高脂飼料加吡格列酮10mg.kg-1d-1灌胃組，8只)，實(shí)驗(yàn)過程中，每周測量大鼠血糖、體重和血壓，干預(yù)六周后，觀察以下指標(biāo)：(1)截尾法取血測定胰

14、島素、甘油三酯、游離脂肪酸。(2)測定24小時尿鈉。(3)實(shí)驗(yàn)?zāi)┧袑?shí)驗(yàn)大鼠行超聲心動圖檢查。(4)取NC組4只，NP組6只，MP組6只，MC組6只大鼠行動靜脈插管術(shù)并應(yīng)用正常血糖高胰島素鉗夾術(shù)評價胰島素敏感性。(5)取NC組4只，NP組6只，MP組6只，MC組6只大鼠行多導(dǎo)生理記錄儀檢查后，取大鼠心肌組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并測定心肌TG含量和內(nèi)臟脂肪重量，并應(yīng)用苦味酸天狼猩紅染色和偏振光檢查觀察心肌組織。
　　 結(jié)果：
　　

15、1體重和內(nèi)臟脂肪
　　 吡格列酮干預(yù)前、后NC組和NP組體重和內(nèi)臟脂肪重量均無明顯差異(P>0.05)。
　　 吡格列酮干預(yù)后開始的前兩周，MP組較MC組體重有小幅上升，但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，兩組體重差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與MC組相比，MP組內(nèi)臟脂肪重量明顯降低(52.96±2.12g，n=6 vs71.74±1.93g，n=6，P<0.05)。
　　 2血壓
　　

16、 吡格列酮干預(yù)前、后NC組和NP組血壓無明顯差異(P>0.05)。
　　 吡格列酮干預(yù)前MC組和MP組血壓無明顯差異(153.5±1.7mmHgvs.155.0±1.2mmHg，P>0.05)。吡格列酮干預(yù)2周后MP組收縮壓開始明顯下降，至干預(yù)四周時降壓幅度達(dá)12.8±1.9mmHg(P<0.01)。至干預(yù)六周時，MP組大鼠收縮壓較MC組顯著降低(152.4±2.7 mmHg vs.141.2±3.1 mmHg，P<0.01)，

17、但各組分別較干預(yù)第四周時的血壓無明顯變化。
　　 3正常血糖高胰島素鉗夾試驗(yàn)
　　 吡格列酮干預(yù)前、后NC組和NP組GIR無明顯差異(P>0.05)。
　　 吡格列酮干預(yù)前MC組和MP組GIR無明顯差異(P>0.05)；吡格列酮干預(yù)后MP組大鼠GIR明顯改善(11.36±1.0mg/kg/min vs6.71±0.6mg/kg/minP<0.05)。
　　 5空腹FFA、窒腹血糖、空腹胰島素
　　

18、 吡格列酮干預(yù)前、后NC組和NP組血TG、血漿Ins及FFA均無明顯差異(P>0.05)。
　　 吡格列酮干預(yù)前MC組和MP組血TG、血漿Ins及FFA均無明顯差異。吡格列酮干預(yù)后，MP組血TG、血漿Ins及FFA水平分別降低了20.6％、42.7％和20.2％，兩組差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　 6心功能
　　 6.1左心室重量指數(shù)
　　 吡格列酮干預(yù)后，NP組與NC組的左心室重量指數(shù)無明顯差

19、異(P>0.05)。吡格列酮干預(yù)后MP組較MC組左心室重量指數(shù)增大，兩者差別無統(tǒng)計學(xué)意義(MP：81.1％±4.2％vsMC：77.6％±4.2％，P>0.05)。
　　 6.2多普勒超聲心動圖結(jié)果
　　 NP與NC組比較，心功能指標(biāo)無明顯差異。MP組干預(yù)后EF、FS、CI顯著增高，分別升高了7.1％、67.2％和7.9(P<0.01)，各組的HR、△T％沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　 6.3左室最大收縮

20、速率(+dp/dtmax)和左室最大舒張速率(-dp/dtmax)
　　 NP組與NC比較，左室最大收縮速率(+dp/dtmax)和左室最大舒張速率(-dp/dtmax)無明顯差異(P>0.05).。與MC組比較，MP組的(+dp/dtmax)(MP：4589.0±623.1，n=6vsMC：3589.4±615.6，n=6)及(-dp/dtmax)(MP：4786.2±632.1，n=6vs MC：3768.9±621.8，n

21、=6)均有明顯改善(P<0.01)。
　　 提示：吡格列酮能夠明顯改善MS大鼠的心功能。
　　 7心肌TG含量
　　 吡格列酮干預(yù)后，NC組和NP組心肌TG含量差別無統(tǒng)計學(xué)意義。MP組心肌TG含量較MC組降低了37.1％(P<0.01)。
　　 8組織病理改變
　　 8.1主動脈H&E染色及偏振光鏡下觀察
　　 MC組膠原纖維明顯增生，以Ⅰ型膠原纖維為主。MP組動脈內(nèi)膜完整，動脈壁增厚減輕

22、，未見明顯膠原纖維沉著。
　　 8.2心臟狼紅染色及偏振光鏡下觀察
　　 MC組心肌細(xì)胞肥大，排列紊亂，在偏振光顯微鏡下觀察可見有大量的膠原纖維圍繞心肌細(xì)胞，以Ⅰ型膠原纖維為主。MP組膠原纖維增生情況較MC組明顯改善。
　　 結(jié)論：
　　 1吡格列酮降壓作用較為顯著，雖然起效略緩，但中長期療效較穩(wěn)定。并推測吡格列酮的緩慢降壓的模式是通過間接方式而發(fā)揮了降壓作用，此種間接方式是改善了胰島素抵抗和/或降低了代

23、償性高胰島素血癥。
　　 2研究提示吡格列酮不會持續(xù)增重，且有改善鈉水潴留的作用，推測與血清胰島素水平的下降有關(guān)。
　　 3心臟形態(tài)學(xué)和超聲心動圖結(jié)果顯示吡格列酮干預(yù)后MS大鼠心肌纖維化減輕，心臟收縮和舒張功能均較前改善。
　　 4 MS大鼠心功能損害改善的機(jī)制與吡格列酮能夠降低血中FFA水平，減輕心肌TG異位沉積有關(guān)。
　　 第三部分高胰島素血癥對MS大鼠血壓的影響及其機(jī)制研究
　　 目的：

24、r>　　 1.構(gòu)建動物模型：①IR+高胰島素血癥；②內(nèi)源性高胰島素血癥被消除+IR；③外源性高胰島素血癥+IR。
　　 2.觀察高胰島素血癥本身是否對血壓會有影響。
　　 3.通過高胰島素血癥對鈉水潴留、交感神經(jīng)系統(tǒng)、RAAS系統(tǒng)和ET-1的影響以探討高胰島素血癥導(dǎo)致血壓升高的機(jī)制。
　　 方法：
　　 24周后，進(jìn)入本部分研究的大鼠有MS組29只，NC組7只。MS組大鼠隨后分為：1.MS組(代謝綜合征

25、組，6只)：繼續(xù)應(yīng)用同論文-成分的高脂飼料喂養(yǎng)。2.DM組(23只)：先給予鏈脲佐菌素按15mg-1.kg-1的劑量腹腔注射造成糖尿病，消除高胰島素血癥，繼續(xù)高脂飼養(yǎng)三周。在成模過程中，有5只大鼠死亡，取其中的6只大鼠行正常血糖高胰島素鉗夾試驗(yàn)。之后DM組大鼠再分為：①HI組(10只)：給予甘精胰島素(來得時)2-4U1次/日皮下注射3周，將血糖水平控制在5-8mmol/L左右，造成外源性高胰島素血癥，再取其中6只大鼠行正常血糖高胰島素

26、鉗夾試驗(yàn)。②DS組(8只)：給予等量生理鹽水皮下注射3周，再取其中6只大鼠行正常血糖高胰島素鉗夾試驗(yàn)。觀察以下指標(biāo)：①每周監(jiān)測大鼠血壓和心率；②測定各組大鼠空腹血清胰島素水平；③測定各組大鼠24小時尿鈉水平；④測定血清內(nèi)皮素、去甲腎上腺素、血管緊張素Ⅱ、醛固酮水平；⑤各組大鼠主動脈H&E染色及偏振光的病理改變；⑥免疫組織化學(xué)檢測動脈中AT1R、ET-1表達(dá)；⑦實(shí)時熒光定量PCR方法比較各組大鼠主動脈中AT1R、ET-1、ETARmRNA

27、表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1血壓及心率
　　 應(yīng)用STZ腹腔注射造成糖尿病3周后，DM組大鼠收縮壓下降了20.9±3.3mmHg(P<0.01)；而DM組大鼠的心率與STZ干預(yù)前相比并無顯著性差異(P>0.05)；應(yīng)用甘精胰島素干預(yù)3周后，與DS組相比，HI組大鼠收縮壓明顯上升，幅度為17.5±3.2 mmHg(P<0.01)。HI組大鼠心率比DS組也明顯升高(P<0.05)。
　　 提示：消除內(nèi)源

28、性高胰島素血癥可以降低MS大鼠的高血壓，而外源性高胰島素血癥可以引起血壓的升高。
　　 2正常血糖高胰島素鉗夾試驗(yàn)
　　 應(yīng)用STZ腹腔注射造成糖尿病3周后，與MS組相比，DM組穩(wěn)定狀態(tài)下平均GIR無顯著性變化(P>0.05)。
　　 應(yīng)用甘精胰島素3周后，與DS組相比，HI組大鼠穩(wěn)定狀態(tài)下平均GIR無顯著性變化(P>0.05)。
　　 提示：在血壓的波動過程中，胰島素抵抗無變化。
　　 3空腹胰

29、島素水平
　　 應(yīng)用STZ組造成糖尿病3周后，DM組大鼠空腹胰島素水平較干預(yù)前相比明顯下降(32.45±6.59μIU/mL vs.119.63±14.86μIU/mL，P<0.01)。
　　 應(yīng)用甘精胰島素治療3周后，HI組大鼠空腹胰島素水平較DS組明顯上升(120.20±20.57μIU/mL Vs.38.86±7.82μIU/mL，P<0.01)。
　　 5內(nèi)皮素、去甲腎上腺素、血管緊張素Ⅱ、醛固酮

30、　　 5.1 ET-1
　　 飼養(yǎng)至24周時，MS組大鼠ET-1水平顯著高于NC組(2.29±0.13 pmol/lvs1.57±0.07pmol/l，P<0.05)。
　　 應(yīng)用STZ組造成糖尿病3周后，DM組大鼠ET-1水平較干預(yù)前相比明顯下降(1.56±0.08pmol/l vs.2.26±0.13pmol/l，P<0.05)。
　　 應(yīng)用甘精胰島素3周后，HI組大鼠ET-1水平較DS組明顯上升(2.23

31、±0.19pmol/1 vs.1.58±0.09pmol/l，P<0.05)。
　　 提示：內(nèi)皮素和血壓、胰島素水平的波動一致。
　　 5.2 NE
　　 飼養(yǎng)至24周時，MS組大鼠NE水平顯著高于NC組(319.4±61.4pg/mlvs105.5±19.7pg/ml，P<0.05)。
　　 應(yīng)用STZ造成糖尿病3周后，DM組大鼠NE水平較干預(yù)前相比明顯下降(120.2±27.1 pg/ml vs.32

32、5.4±66.4pg/ml，P<0.05)。
　　 應(yīng)用甘精胰島素3周后，HI組大鼠NE水平較DS組明顯上升(232.3±52.8pg/ml vs.115.6±21.7pg/ml，P<0.05)。
　　 5.3 AngⅡ
　　 飼養(yǎng)至24周時，MS組大鼠AngⅡ水平顯著高于NC組(201.5±23.1 pg/ml vs.89.0±12.2pg/ml，P<0.05)。
　　 應(yīng)用STZ組干預(yù)前后，大鼠Ang

33、Ⅱ水平無明顯差異(P>0.05)。
　　 應(yīng)用甘精胰島素干預(yù)前后，大鼠AngⅡ水平無明顯差異(P>0.05)。
　　 5.4 ALD
　　 飼養(yǎng)至24周時，MS組大鼠ALD水平顯著高于NC組(1349.6±42.4pg/mlvs957.9±49.2pg/ml，P<0.05)。
　　 應(yīng)用STZ組干預(yù)前后，大鼠ALD水平無明顯差異(P>0.05)。
　　 應(yīng)用甘精胰島素干預(yù)前后，大鼠ALD水平無明顯

34、差異(P>0.05)。
　　
　　 6主動脈中AT1、ET-1蛋白表達(dá)
　　 6.1飼養(yǎng)至24周時，MS組AT1、ET-1的表達(dá)比NC組明顯增強(qiáng)，IOD值明顯升高(P<0.05)。
　　 6.2應(yīng)用胰島素干預(yù)后，HI組主動脈ET-1的表達(dá)比DS組明顯增強(qiáng)(P<0.05)。而DS組及HI組主動脈AT1的表達(dá)相比較無顯著性差異(P>0.05)。
　　 7實(shí)時熒光定量PCR主動脈AT1、ET-1、ET

35、AR mRNA的表達(dá)
　　 7.1 MS組主動脈AT1、ET-1、ETAR mRNA相對表達(dá)分別為1.503±0.13、1.397±0.12、1.711±0.15與NC組相比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 7.2 AT1mRNA表達(dá)：HI組AT1mRNA相對表達(dá)為1.086±0.08，與DS組相比，差別沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 7.3 ET-1 mRNA表達(dá)：HI組主動脈ET-1 mR

36、NA相對表達(dá)為1.302±0.11與DS組相比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 7.4 ETAR mRNA表達(dá)：HI組主動脈ETARmRNA相對表達(dá)為1.586±0.14，與DS組相比，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.本研究發(fā)現(xiàn)MS大鼠血壓和胰島素水平的變化具有同步性，具體體現(xiàn)為正常血壓(無胰島素抵抗，無高胰島素血癥)→血壓升高(胰島素抵抗，高胰島素血癥)→血壓下降(胰島素抵

37、抗不變，無高胰島素血癥)→血壓再次升高(胰島素抵抗不變，高胰島素血癥)，從而得出高胰島素血癥本身即可導(dǎo)致高血壓的觀點(diǎn)。
　　 2.高胰島素血癥引起血壓升高的機(jī)制與高胰島素血癥減少尿鈉排泄，使交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮性增加，使血管張力增強(qiáng)，及導(dǎo)致內(nèi)皮素合成與釋放增多有關(guān)。推測胰島素在血壓升高中扮演的角色更傾向于是一個增速劑。
　　 3.對臨床工作的啟示是對1型和2型糖尿病應(yīng)用胰島素治療過程中應(yīng)盡量避免醫(yī)源性高胰島素血癥導(dǎo)致的血壓升

38、高。
　　 第四部分高游離脂肪酸血癥對血壓的影響及機(jī)制研究
　　 背景和目的：目前的一些研究表明高FFA血癥是胰島素抵抗在高血壓發(fā)病機(jī)制中的作用環(huán)節(jié)之一。雖然高FFA血癥導(dǎo)致血壓升高的機(jī)制尚未明確，但體外研究發(fā)現(xiàn)高FFA可抑制內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮一氧化氮合酶(eNOS)活性及內(nèi)皮依賴性血管舒張功能(EDV)。然而，血中FFA水平升高是否能獨(dú)立抑制活體主動脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS活性和表達(dá)及EDV尚缺乏直接證據(jù)，高FFA血癥導(dǎo)致的血壓升

39、高及其引起的EDV受損兩者之間的關(guān)系及是否與氧化應(yīng)激有關(guān)目前尚不明確，還需要進(jìn)一步探討。
　　 多個研究已經(jīng)證實(shí)脂代謝紊亂是MS的始動因素，在本部分的研究中將通過短期輸注脂肪乳急性升高血中FFA水平，觀察升高FFA水平是否可導(dǎo)致大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞NO產(chǎn)生減少及內(nèi)皮依賴性血管舒張功能受損，而高FFA血癥導(dǎo)致的高血壓是否與此有關(guān)，并探討氧化應(yīng)激在高FFA血癥所致的血壓升高中的作用。
　　 方法：
　　 將12周齡雄性S

40、D大鼠隨機(jī)分成三組：NC組(對照組，20只)，F(xiàn)FA組(游離脂肪酸組，22只)及NAC組(N-乙酰半胱氨酸組，23只)。NC組大鼠經(jīng)頸靜脈插管輸注生理鹽水(18μl/min)4小時，F(xiàn)FA組大鼠采用20％脂肪乳(18μl/min)+肝素(0.72IU/min)輸注4小時，NAC組大鼠給予20％脂肪乳(18μl/min)+肝素(0.72IU/min)+NAC(2.76μmol/kg/min)輸注4小時。觀察以下指標(biāo)①應(yīng)用多導(dǎo)生理記錄儀記錄

41、輸注過程中大鼠血壓變化；②正常血糖高胰島素鉗夾試驗(yàn)，評價外周組織胰島素抵抗程度；③處死大鼠后取出主動脈置于器官浴槽中，觀察離體主動脈環(huán)對乙酰膽堿或硝普鈉的舒張反應(yīng)，以評價內(nèi)皮依賴性/非依賴性血管舒張(EDV/EIV)功能：④測定血中FFA、活性氧(ROS)、還原型谷胱甘肽(GSH)、NG2-/NO3-水平；⑤采用實(shí)時熒光定量PCR方法比較三組大鼠主動脈eNOSmRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.FFA組血FFA水

42、平顯著高于NC組(P<0.05)。
　　 2.經(jīng)過4小時脂肪乳+肝素輸注，F(xiàn)FA組大鼠血壓明顯升高，收縮壓(SBP)上升了11.5±2.2mmHg，舒張壓(DBP)上升了6.0±1.2mmHg，而NAC組血壓沒有明顯變化。
　　 3.FFA組葡萄糖輸注率(GIR)為5.34±0.6 mg/kg/min，明顯低于NC組13.4±0.5mg/kg/min(P<0.01)，NAC組與NC組相比沒有顯著性差異。
　　 4

43、.FFA組對乙酰膽堿的舒張反應(yīng)明顯受損，對硝普鈉的舒張反應(yīng)與NC組比無明顯差別。
　　 5.FFA組血ROS水平明顯高于NC組(864.3±135.4 U/mL vs.452.4±90.5U/mL，P<0.05)，血GSH水平明顯低于NC組(153.1±55.9 mg/L vs.171.9±60.5mg/L，P<0.05)，NAC組與NC組無明顯差別。
　　 6.FFA組與NC組相比，血NO2-/NO3-水平明顯降低(1

44、4.3±1.9μmol/l vs.19.3±2.9μmol/l，P<0.05)，eNOS mRNA表達(dá)降低41.2％(P<0.05)；NAC組與FFA組相比，血NO2-/NO3-水平明顯升高，(17.9±1.6μmol/l vs.14.3±1.9μmol/l，P<0.05)，eNOS mRNA表達(dá)上升30.5％(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 高游離脂肪酸血癥可誘發(fā)高血壓，可能是通過抑制內(nèi)皮細(xì)胞eNOS mRNA表