DADS抑制人胃癌細胞增殖及誘導(dǎo)蛋白質(zhì)組差異表達的初步研究.pdf

1、第一部分二烯丙基二硫抑制小鼠腎包膜下移植人胃癌細胞的生長作用;目的:探討二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)對小鼠腎包膜下移植的人胃癌MGC803細胞的生長抑制作用.方法:將體外培養(yǎng)的人胃癌MGC803細胞接種于經(jīng)免疫抑制的昆明小鼠的腎包膜下,經(jīng)腹腔注射不同處理因素,第6天處死,檢測瘤體積的大小,計算抑瘤率.粘液染色及HE染色觀察用藥前后人胃癌MGC803細胞的形態(tài)學(xué)變化,以及小鼠肝臟、脾臟、骨髓的變化.用免疫組

2、化方法檢測瘤組織中相關(guān)抗原的表達.觀察DADS對小鼠腎包膜下的人胃癌MGC803細胞的生長抑制作用.結(jié)論:1.DADS可明顯抑制人胃癌MGC803細胞在小鼠腎包膜下的生長.2.DADS對腎包膜下移植瘤小鼠的肝臟、脾臟、骨髓無毒性作用.第二部分二烯丙基二硫誘導(dǎo)人胃癌細胞蛋白質(zhì)組差異表達的初步研究;目的:近年來,蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于腫瘤研究領(lǐng)域,但對胃癌的研究較少.該課題旨在研究二烯丙基二硫(DADS)體內(nèi)抑制人胃癌MGC803細胞生

3、長作用及探討DADS誘導(dǎo)人胃癌MGC803細胞蛋白質(zhì)組差異表達的相關(guān)分子機制.方法:采用蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù),如二維電泳、圖像分析、質(zhì)譜技術(shù)等方法,觀察DADS對體外培養(yǎng)的人胃癌MGC803細胞的生長抑制以及蛋白質(zhì)組的差異表達.用固相PH梯度雙向凝膠電泳分離人胃癌MGC803細胞和DADS處理的MGC803細胞的總蛋白,凝膠經(jīng)過銀染后用PDQuest軟件進行分析,對部分重復(fù)性好、邊界清晰的差異蛋白質(zhì)點經(jīng)膠內(nèi)原位酶解,用基質(zhì)輔助激光解吸電離

4、飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)測定肽質(zhì)量指紋圖(PMF),將所得的數(shù)據(jù)進行生物信息學(xué)處理.結(jié)果:在相同條件下,對DADS處理前后MGC803細胞兩種樣品的總蛋白質(zhì)進行雙向電泳,獲得重復(fù)性較好的雙向電泳銀染圖譜,經(jīng)掃描成像及PDQuest軟件分析,在相同條件下識別的蛋白質(zhì)斑點數(shù)分別為對照組576±1 4個,處理組583±4個,其平均匹配率分別為76％和70％.結(jié)果顯示,在兩組圖譜中有421個蛋白質(zhì)斑點匹配,有200個點未被匹配,

5、其中與對照組相比,蛋白質(zhì)表達量相差2倍以上的有291個,相差10倍以上的有61個.隨機切割部分差異表達的銀染蛋白質(zhì)點,用TPCK處理的胰酶酶解后上質(zhì)譜分析,獲得相關(guān)蛋白的肽質(zhì)量指紋圖譜,經(jīng)MS-FIT軟件上相關(guān)數(shù)據(jù)庫查詢,初步鑒定出其中的24種差異表達的蛋白質(zhì).發(fā)現(xiàn)了一些與細胞分化、腫瘤轉(zhuǎn)移、細胞凋亡、細胞周期、細胞免疫及代謝等相關(guān)的蛋白質(zhì),如胃粘蛋白、nM23蛋白、尿激酶纖溶酶原激活劑受體(uPAR)、LIM激酶、X-連鎖凋亡抑制蛋白

6、(XIAP)、CDC2、主要組織相容性復(fù)合體DR-beta-1鏈、T細胞受體(TCR)、Toll/Interleukin-1受體類似蛋白3、結(jié)腸癌抗原NY-CO-45、蘋果酸脫氫酶、異質(zhì)核核糖核蛋白F(hnRNP F)、磷酸二酯酶、鈷胺素傳遞蛋白Ⅱ等,這些蛋白質(zhì)可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起著潛在的作用.結(jié)論:1.DADS可能通過上調(diào)nM23蛋白,下調(diào)uPAR、LIM激酶及CDC2的表達而降低胃癌的侵襲能力.2.DADS可能通過減少XIAP的

7、表達促進胃癌細胞凋亡.3.DADS可能通過下調(diào)CDC2表達參與G2/M期阻滯.4.DADS可能通過促進MHC-Ⅰ類分子以及TCR的表達、Toll/Interleukin-1receptor-like蛋白3激活NF-kappaB途徑,以及類蛇毒素蛋白酶促進T細胞及其它殺傷細胞對腫瘤細胞的殺傷,引發(fā)機體的殺瘤效應(yīng).5.NY-CO-45抗原可能作為一種新的胃癌潛在診斷及預(yù)后標(biāo)準(zhǔn).6.DADS可能導(dǎo)致AMP增加,活化蘋果酸脫氫酶;下調(diào)hnRNP