DADS抑制人胃癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)蛋白質(zhì)組差異表達(dá)的初步研究.pdf

1、第一部分二烯丙基二硫抑制小鼠腎包膜下移植人胃癌細(xì)胞的生長(zhǎng)作用;目的:探討二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)對(duì)小鼠腎包膜下移植的人胃癌MGC803細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用.方法:將體外培養(yǎng)的人胃癌MGC803細(xì)胞接種于經(jīng)免疫抑制的昆明小鼠的腎包膜下,經(jīng)腹腔注射不同處理因素,第6天處死,檢測(cè)瘤體積的大小,計(jì)算抑瘤率.粘液染色及HE染色觀察用藥前后人胃癌MGC803細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化,以及小鼠肝臟、脾臟、骨髓的變化.用免疫組

2、化方法檢測(cè)瘤組織中相關(guān)抗原的表達(dá).觀察DADS對(duì)小鼠腎包膜下的人胃癌MGC803細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用.結(jié)論:1.DADS可明顯抑制人胃癌MGC803細(xì)胞在小鼠腎包膜下的生長(zhǎng).2.DADS對(duì)腎包膜下移植瘤小鼠的肝臟、脾臟、骨髓無(wú)毒性作用.第二部分二烯丙基二硫誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞蛋白質(zhì)組差異表達(dá)的初步研究;目的:近年來(lái),蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于腫瘤研究領(lǐng)域,但對(duì)胃癌的研究較少.該課題旨在研究二烯丙基二硫(DADS)體內(nèi)抑制人胃癌MGC803細(xì)胞生

3、長(zhǎng)作用及探討DADS誘導(dǎo)人胃癌MGC803細(xì)胞蛋白質(zhì)組差異表達(dá)的相關(guān)分子機(jī)制.方法:采用蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù),如二維電泳、圖像分析、質(zhì)譜技術(shù)等方法,觀察DADS對(duì)體外培養(yǎng)的人胃癌MGC803細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制以及蛋白質(zhì)組的差異表達(dá).用固相PH梯度雙向凝膠電泳分離人胃癌MGC803細(xì)胞和DADS處理的MGC803細(xì)胞的總蛋白,凝膠經(jīng)過(guò)銀染后用PDQuest軟件進(jìn)行分析,對(duì)部分重復(fù)性好、邊界清晰的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)經(jīng)膠內(nèi)原位酶解,用基質(zhì)輔助激光解吸電離

4、飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)測(cè)定肽質(zhì)量指紋圖(PMF),將所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)處理.結(jié)果:在相同條件下,對(duì)DADS處理前后MGC803細(xì)胞兩種樣品的總蛋白質(zhì)進(jìn)行雙向電泳,獲得重復(fù)性較好的雙向電泳銀染圖譜,經(jīng)掃描成像及PDQuest軟件分析,在相同條件下識(shí)別的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)分別為對(duì)照組576±1 4個(gè),處理組583±4個(gè),其平均匹配率分別為76％和70％.結(jié)果顯示,在兩組圖譜中有421個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn)匹配,有200個(gè)點(diǎn)未被匹配,

5、其中與對(duì)照組相比,蛋白質(zhì)表達(dá)量相差2倍以上的有291個(gè),相差10倍以上的有61個(gè).隨機(jī)切割部分差異表達(dá)的銀染蛋白質(zhì)點(diǎn),用TPCK處理的胰酶酶解后上質(zhì)譜分析,獲得相關(guān)蛋白的肽質(zhì)量指紋圖譜,經(jīng)MS-FIT軟件上相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún),初步鑒定出其中的24種差異表達(dá)的蛋白質(zhì).發(fā)現(xiàn)了一些與細(xì)胞分化、腫瘤轉(zhuǎn)移、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞免疫及代謝等相關(guān)的蛋白質(zhì),如胃粘蛋白、nM23蛋白、尿激酶纖溶酶原激活劑受體(uPAR)、LIM激酶、X-連鎖凋亡抑制蛋白

6、(XIAP)、CDC2、主要組織相容性復(fù)合體DR-beta-1鏈、T細(xì)胞受體(TCR)、Toll/Interleukin-1受體類(lèi)似蛋白3、結(jié)腸癌抗原NY-CO-45、蘋(píng)果酸脫氫酶、異質(zhì)核核糖核蛋白F(hnRNP F)、磷酸二酯酶、鈷胺素傳遞蛋白Ⅱ等,這些蛋白質(zhì)可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起著潛在的作用.結(jié)論:1.DADS可能通過(guò)上調(diào)nM23蛋白,下調(diào)uPAR、LIM激酶及CDC2的表達(dá)而降低胃癌的侵襲能力.2.DADS可能通過(guò)減少XIAP的

7、表達(dá)促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡.3.DADS可能通過(guò)下調(diào)CDC2表達(dá)參與G2/M期阻滯.4.DADS可能通過(guò)促進(jìn)MHC-Ⅰ類(lèi)分子以及TCR的表達(dá)、Toll/Interleukin-1receptor-like蛋白3激活NF-kappaB途徑,以及類(lèi)蛇毒素蛋白酶促進(jìn)T細(xì)胞及其它殺傷細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷,引發(fā)機(jī)體的殺瘤效應(yīng).5.NY-CO-45抗原可能作為一種新的胃癌潛在診斷及預(yù)后標(biāo)準(zhǔn).6.DADS可能導(dǎo)致AMP增加,活化蘋(píng)果酸脫氫酶;下調(diào)hnRNP