Oct-4作為胰腺癌干細胞樣細胞的鑒定標志物及其作用和機制研究.pdf

1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。論文作者簽名：碰日期：蘭翌!皇：丘fOct4作為胰腺癌干細胞樣細胞的鑒定標志物及其作用和機制研究中文摘

2、要Oct4作為胰腺癌干細胞樣細胞的鑒定標志物及其作用和機制研究中文摘要目的：1探討胰腺癌干細胞樣細胞分離純化、表型分析和生物學(xué)功能特性；2探討microRNA靶向調(diào)控胰腺癌干細胞樣細胞生長增殖作用；3探討Hedgehog信號通路參與胰腺癌干細胞樣細胞生長增殖調(diào)控機制。方法：1選取手術(shù)后新鮮胰腺癌組織標本，提取和制備原代胰腺癌細胞，進行細胞體外擴增培養(yǎng)。腫瘤干細胞成球?qū)嶒灧蛛x胰腺癌細胞中干細胞樣細胞，并培養(yǎng)傳代，采用HE染色、細胞免疫熒光

3、鑒定。應(yīng)用原代胰腺癌細胞制備裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型用以富集腫瘤細胞。RealtimeRTPCR檢測胰腺癌細胞干細胞關(guān)鍵因子的表達。構(gòu)建質(zhì)粒載體使篩選的關(guān)鍵因子啟動子融合熒光蛋白轉(zhuǎn)染原代胰腺癌細胞并再次建立裸鼠皮下移植瘤模型。流式細胞術(shù)(FCM)分析目標因子陽性表達細胞含量及所占比例并進行分選。通過MTT法測定細胞存活率，克隆形成實驗測定細胞克隆形成效率來對比干細胞關(guān)鍵因子陽性和陰性表達細胞增殖情況，對比兩種細胞的成球能力，并進行兩種細

4、胞裸鼠皮下移植成瘤率的對比。2通過miRNA芯片分別檢測干細胞關(guān)鍵因子陽性和陰性表達細胞中的miRNA變化并對比分析，篩選潛在與干細胞關(guān)鍵因子表達相關(guān)的miRNA，RealtimeRTPCR分別檢測胰腺癌組織標本和細胞株中的相關(guān)miRNA表達，通過擴增目的基因片段，及預(yù)測作用位點突變類型，分別構(gòu)建入pGL4這個含有熒光素酶(Luciferase)的質(zhì)粒形成載體，和miRNA共轉(zhuǎn)染于人正常胰腺上皮細胞株HPDE6c7中，熒光素酶活性雙報告