慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈彈性功能與MMP-2表達(dá)關(guān)系的研究.pdf

1、目的:心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是慢性腎衰竭患者最常見的并發(fā)癥和最主要的致死原因，占慢性腎衰竭患者全因死亡的50％。血管彈性功能減低與慢性腎衰竭患者心血管死亡率相關(guān)，其與血管壁彈性蛋白的降解關(guān)系密切。多種蛋白酶可以降解彈性蛋白，其中主要是基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)，但目前關(guān)于慢性腎衰竭動(dòng)脈彈性功能與MMP-2表達(dá)之間的關(guān)系尚不明確。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈彈性功能與相應(yīng)部位MM

2、P-2表達(dá)，探討二者之間的關(guān)系，為臨床治療提供靶點(diǎn)。
　　方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)大鼠
　　購(gòu)自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的20只清潔級(jí)、健康、7周齡的雄性SD大鼠，于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院動(dòng)物中心屏障環(huán)境適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。
　　2.分組及造模
　　分組將20只SD大鼠隨機(jī)分為3組，即正常對(duì)照組（6只），慢性腎衰竭組（7只），慢性腎衰竭血管鈣化組（7只）。
　　造模正常對(duì)照組:在實(shí)驗(yàn)1-3周給予1.5％甲基纖維

3、素6ml/kg每天灌胃，在4-8周給予1.5％甲基纖維素6ml/kg隔日灌胃;慢性腎衰竭組:在實(shí)驗(yàn)1-3周給予100mg/ml的硫酸腺嘌呤懸濁液6ml/kg每天灌胃，在實(shí)驗(yàn)4-8周給予1.5％甲基纖維素6ml/kg隔日灌胃;慢性腎衰竭血管鈣化組:在實(shí)驗(yàn)1-3周給予100mg/ml的硫酸腺嘌呤6ml/kg每天灌胃，在實(shí)驗(yàn)4-8周給予骨化三醇200ng/kg隔日灌胃。
　　3.實(shí)驗(yàn)方法
　　對(duì)大鼠腎臟組織進(jìn)行HE染色，觀察腎臟結(jié)

4、構(gòu)的病理改變，化驗(yàn)血清尿素氮、肌酐，以判斷慢性腎衰竭大鼠模型是否建立成功。測(cè)量主動(dòng)脈PWV，EVG染色觀察血管彈性纖維改變;主動(dòng)脈MMP-2、cbfa1表達(dá):對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈上段進(jìn)行免疫組化MMP-2、cbfa1染色，檢測(cè)三組血管MMP-2、cbfa1蛋白的表達(dá)情況;取胸主動(dòng)脈下段用RT-PCR方法檢測(cè)血管壁核心結(jié)合因子a1(cbfa1)及MMP-2 mRNA的表達(dá)情況;取胸主動(dòng)脈中段進(jìn)行von Kossa染色檢測(cè)血管壁鈣化情況，取腹主動(dòng)

5、脈用鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法測(cè)定血管壁鈣含量情況。
　　4.統(tǒng)計(jì)分析
　　用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)，用S-N-K檢驗(yàn)(Student-Newman-Keuls，SNK)作多組間均數(shù)兩兩比較，相關(guān)分析符合雙變量正態(tài)分布作Pearson積差相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　

6、結(jié)果:
　　1.慢性腎衰竭大鼠模型的構(gòu)建腎臟病理染色:正常對(duì)照組腎小球、腎小管、間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，慢性腎衰竭組和慢性腎衰竭血管鈣化組腎小球發(fā)生硬化，腎小管內(nèi)可見結(jié)晶。
　　與正常對(duì)照組比較，慢性腎衰竭組、慢性腎衰竭血管鈣化組血肌酐明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別為82.3±4.73 vs32.0±2.0，P＜0.05;87.6±3.18 vs32.0±2.0，P＜0.05;與正常對(duì)照組比較，慢性腎衰竭組、慢性腎衰竭血管鈣化組血尿

7、素氮明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別為18.1±1.60 vs7.1±0.43，P＜0.05;19.0±1.78 vs7.1±0.43，P＜0.05;與慢性腎衰竭組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組血肌酐、尿素氮升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別為87.6±3.18 vs82.3±4.73，P＞0.05;19.0±1.78 vs18.1±1.60,P＞0.05。
　　2.慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈鈣化情況von Kossa染色發(fā)現(xiàn)慢腎衰血管鈣化組發(fā)

8、生明顯的主動(dòng)脈鈣化，但是慢性腎衰竭組和正常對(duì)照組均未發(fā)生主動(dòng)脈鈣化。與正常對(duì)照組相比，慢性腎衰竭組主動(dòng)脈鈣含量升高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，為7.17±2.54 vs6.46±2.14，P＞0.05;慢性腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈鈣含量顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，為16.88±6.40 vs6.46±2.14, P＜0.05。
　　3.慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈彈性纖維的改變EVG染色結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，慢性腎衰竭組和慢腎衰竭血管鈣化組主

9、動(dòng)脈彈性纖維變直，彈性纖維間的微纖維減少;與慢性腎衰竭組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈彈性纖維數(shù)量明顯較少，鈣化處發(fā)生斷裂。
　　4.慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈彈性功能的改變與正常對(duì)照組比較，慢性腎衰竭組主動(dòng)脈PWV、慢性腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈PWV值均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分別為5.90±0.022 vs2.87±0.006，P＜0.05;9.032±0.041 vs2.87±0.006，P＜0.05;與慢性腎衰竭組比較，慢性

10、腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈PWV值明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，為9.032±0.041 vs5.90±0.022，P＜0.05。
　　5.慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈cbfa1及MMP-2的表達(dá)與正常對(duì)照組比較，慢性腎衰竭組及慢性腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈cbfa1及MMP-2 mRNA的表達(dá)均明顯升高(P＜0.05);與慢性腎衰竭組比較，慢性腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈cbfa1及MMP-2 mRNA的表達(dá)明顯升高(P＜0.05)。與正常對(duì)照組比較，

11、慢性腎衰竭組及慢性腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈MMP-2蛋白的表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，與慢性腎衰竭組相比，慢性腎衰竭血管鈣化組主動(dòng)脈MMP-2蛋白的表達(dá)明顯升高(P＜0.05)。
　　6.慢性腎衰竭大鼠主動(dòng)脈PWV改變與相應(yīng)部位血管MMP-2及鈣含量的關(guān)系主動(dòng)脈PWV與主動(dòng)脈MMP-2蛋白表達(dá)做相關(guān)分析呈正相關(guān)(r=0.754，P=0.02)。主動(dòng)脈PWV與主動(dòng)脈鈣含量做相關(guān)分析呈正相關(guān)(r=0.736，P=0.03)。主動(dòng)脈MM