胸膜肺炎放線桿菌外毒素ApxIVA的翻譯后修飾及其生物學(xué)活性研究.pdf

1、由胸膜肺炎放線桿菌（APP）感染所引起的豬傳染性胸膜肺炎（PCP）是一種高度接觸性的呼吸道傳染病。該病可造成豬的大量死亡，給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。Apx外毒素是APP最重要的致病因子，APP能產(chǎn)生四種外毒素:ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和ApxⅣ。其中前三種毒素的活性依賴于由apxⅠC、apxⅡC和apxⅢC編碼的脂肪酸?；嚓P(guān)蛋白，而ApxⅣ的活性及活化機(jī)制缺乏研究，其上游基因orf1編碼的蛋白可能參與ApxⅣ的活化。本研

2、究選取ApxⅣ的結(jié)構(gòu)蛋白ApxⅣA為研究對(duì)象，對(duì)其翻譯后修飾的生物學(xué)活性進(jìn)行了研究，取得了如下結(jié)果:
　　1.ApxⅣA的表達(dá)純化:通過(guò)同源重組法構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET-apxⅣA、pET-orf1-apxⅣA、pET-apxⅠC-apxⅣA和pET-apxⅡC-apxⅣA，并分別對(duì)不同翻譯后修飾條件下的重組蛋白ApxⅣA、ORF1-ApxⅣA、ApxⅠC-ApxⅣA和ApxⅡC-ApxⅣA進(jìn)行表達(dá)純化。
　　2.Apx

3、ⅣA溶血活性的鑒定:本試驗(yàn)分別采用綿羊紅細(xì)胞和豬紅細(xì)胞對(duì)ApxⅣA的溶血活性和協(xié)同溶血效應(yīng)(CAMP)進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，ApxⅣA、ApxⅠC-ApxⅣA和ApxⅡC-ApxⅣA都沒(méi)有溶血活性，僅ORF1-ApxⅣA表現(xiàn)出協(xié)同溶血效應(yīng)和較弱的溶血活性，且對(duì)豬紅細(xì)胞的溶血活性略強(qiáng)于對(duì)綿羊紅細(xì)胞的溶血活性。說(shuō)明，在與ORF1共表達(dá)時(shí)，ApxⅣA才表現(xiàn)出溶血活性。
　　3.ApxⅣA對(duì)SJPL細(xì)胞活性的影響:用重組蛋白ApxⅣA、A

4、pxⅣA、ORF1-ApxⅣA、ApxⅠC-ApxⅣA和ApxⅡC-ApxⅣA分別處理SJPL細(xì)胞，結(jié)果表明，ORF1-ApxⅣA能顯著降低SJPL細(xì)胞的活性，這一作用隨ORF1-ApxⅣA濃度的降低而減弱;且ORF1-ApxⅣA對(duì)SJPL細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，并能使SJPL細(xì)胞發(fā)生皺縮和裂解。說(shuō)明，在與ORF1共表達(dá)時(shí)，ApxⅣA對(duì)SJPL細(xì)胞的生長(zhǎng)、形態(tài)及活性產(chǎn)生影響。
　　4.ApxⅣA對(duì)SJPL細(xì)胞凋亡的影響:用ORF1-