缺氧條件下絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞基質(zhì)蛋白Cyr61表達(dá)下調(diào)在子癇前期發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究.pdf

1、第一部分子癇前期患者胎盤組織中Cyr61 及CTGF表達(dá)研究
　　 目的：檢測(cè)在正常孕婦和子癇前期患者胎盤組織中Cyr61和CTGF的表達(dá)情況，探討它們?cè)谧影B前期發(fā)病機(jī)制中的作用及兩者間的關(guān)聯(lián)。
　　 方法：
　　 采用免疫組化SP 法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)34例重度子癇前期孕婦和16例正常晚期妊娠孕婦胎盤組織中Cyr61和CTGF 蛋白定位表達(dá)、mRNA 水平表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．

2、Cyr61在胎盤絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中均有表達(dá)，主要表達(dá)在合體滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿內(nèi)；CTGF在胎盤絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中均有表達(dá)，主要表達(dá)在細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿內(nèi)。重度子癇前期患者胎盤中Cyr61 蛋白表達(dá)水平明顯低于正常組(P<0.01)。CTGF在重度子癇前期組胎盤中蛋白表達(dá)水平明顯高于正常組(P<0.05)。2．Cyr61 mRNA在重度子癇前期組的表達(dá)水平較正常組明顯下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<

3、0.05）；CTGF mRNA在重度子癇前期組的表達(dá)水平較正常妊娠晚期組明顯增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01）。3．在重度子癇前期患者胎盤組織中Cyr61與CTGF表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.34，P<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 1．子癇前期胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中Cyr61與CTGF的表達(dá)異常，導(dǎo)致VEGF的生成減少和ECM的重塑障礙，可能與子癇前期的發(fā)病有關(guān)。
　　 2．子癇前期胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中的Cyr61與C

4、TGF的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，外源性加入Cyr61或VEGF 可能拮抗CTGF在子癇前期發(fā)病中的作用。
　　 第二部分缺氧條件下絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞增殖及凋亡情況
　　 目的：通過(guò)二氯化鈷化學(xué)物質(zhì)來(lái)誘導(dǎo)絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞缺氧過(guò)程的出現(xiàn)，探討缺氧條件下滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖能力及細(xì)胞凋亡情況。
　　 方法：
　　 1．MTT 法檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖能力：滋養(yǎng)細(xì)胞在二氯化鈷終濃度為150μmol/L、300μmol/L的培養(yǎng)基中分別培

5、養(yǎng)：6h、12h、24h、48h和72h。常氧組細(xì)胞在不含CoCl2的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
　　 2．流式細(xì)胞儀檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡情況：滋養(yǎng)細(xì)胞在二氯化鈷終濃度為：
　　 300μmol/L的培養(yǎng)基中培養(yǎng)6h、12h、24h、48h和72h。
　　 結(jié)果：
　　 1.與正常組相比，滋養(yǎng)細(xì)胞在經(jīng)過(guò)CoCl2 處理后細(xì)胞增殖活力受到抑制；且當(dāng)CoCl2的濃度為300μmol/L 時(shí)，對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)較150

6、μmol/更為明顯(P<0.05)。當(dāng)滋養(yǎng)細(xì)胞在300μmol/L CoCl2 作用24h 時(shí)，細(xì)胞增殖能力受到顯著抑制(P<0.01)。2.與正常對(duì)照組相比，滋養(yǎng)細(xì)胞在終濃度為300μmol/L CoCl2 干預(yù)下，其細(xì)胞凋亡水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)增加，在缺氧12h 凋亡增加明顯(10.7+/-0.8-fold; P<0.01)且在缺氧24h細(xì)胞凋亡水平達(dá)峰值(24.0+/-3.4-fold; P<0.05)。
　　 結(jié)論：

7、>　　 采用CoCl2模擬的化學(xué)缺氧能抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其細(xì)胞凋亡，隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞凋亡增加且在缺氧24h細(xì)胞凋亡最顯著。
　　 第三部分缺氧作用下絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞中Cyr61表達(dá)在子癇前期發(fā)病中的作用研究
　　 目的：研究滋養(yǎng)細(xì)胞在CoCl2模擬的化學(xué)缺氧條件下，細(xì)胞基質(zhì)蛋白Cyr61在滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)情況；探討Cyr61的表達(dá)與子癇前期發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究。
　　 方法：
　　 1．采用細(xì)胞

8、免疫熒光法檢測(cè)Cyr61 蛋白在滋養(yǎng)細(xì)胞中的定位表達(dá)。
　　 2．實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)缺氧條件下滋養(yǎng)細(xì)胞中Cyr61 轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況。
　　 3．蛋白印跡法檢測(cè)缺氧條件下滋養(yǎng)細(xì)胞中Cyr61的蛋白水平的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．細(xì)胞基質(zhì)蛋白Cyr61 主要表達(dá)在滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿中，部分表達(dá)在細(xì)胞核中。
　　 2．在缺氧6h和12h 時(shí)，滋養(yǎng)細(xì)胞中的Cyr61表達(dá)增加；隨著缺氧時(shí)間延長(zhǎng)達(dá)2

9、4h和48h后，該蛋白表達(dá)下調(diào)(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 低氧環(huán)境可以誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞中Cyr61的產(chǎn)生；但是隨著缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)，滋養(yǎng)細(xì)胞中的Cyr61表達(dá)下調(diào)。
　　 第四部分子癇前期患者外周血清干預(yù)下絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞中Cyr61表達(dá)下調(diào)在子癇前期發(fā)病中的相關(guān)研究
　　 目的：研究絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞在正常孕婦和子癇前期患者外周血清干預(yù)下，該細(xì)胞中Cyr61的表達(dá)情況。
　　 方法：
　　

10、 1．采用細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞中Cyr61的表達(dá)定位。
　　 2．實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)子癇前期患者外周血清處理24h后，滋養(yǎng)細(xì)胞中Cyr61 轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況。
　　 3．蛋白印跡法檢測(cè)子癇前期患者外周血清處理24h后，滋養(yǎng)細(xì)胞中Cyr61的蛋白水平的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1．細(xì)胞基質(zhì)蛋白Cyr61 主要表達(dá)在滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿中，部分表達(dá)子在細(xì)胞核中。2.與正常孕婦外周血清干預(yù)相比，滋養(yǎng)細(xì)