滋養(yǎng)細(xì)胞凝血因子表達(dá)失衡與子癇前期發(fā)病關(guān)系研究.pdf

1、第一部分 子癇前期患者血漿凝血、纖溶相關(guān)因子水平變化目的:探討凝血、纖溶相關(guān)因子平衡失調(diào)在重度子癇前期患者外周血病理性高凝狀態(tài)發(fā)生機(jī)制中的作用。方法:采用ELLISA方法測(cè)定15例重度子癇前期孕婦外周血凝血、纖溶相關(guān)因子的濃度作為研究對(duì)象，測(cè)定的因子包括TF、TFPI、TFPI-2、t-PA和PAI-1。同時(shí)測(cè)定30例正常晚期妊娠孕婦外周血上述5個(gè)因子濃度作為對(duì)照。結(jié)果:重度子癇前期患者的D二聚體濃度及FDP陽性率均顯著高于對(duì)照組，而

2、血小板計(jì)數(shù)則顯著低于對(duì)照組(P<0.01)。重度子癇前期患者的血漿TF、PAI-1濃度分別為(53.02±8.64)pg/m1和(81.37±14.87)ng/m1分別顯著高于對(duì)照組的TF濃度(30.84±9.04)pg/ml及PAI-1濃度(63.15±8.88)ng/ml，兩組比較均有顯著性差異(p<0.01)。而重度子癇前期患者的TFPI濃度(3.04±1.08)ng/ml、TFPI-2濃度(13.31±3.38)和t-PA濃度(

3、42.03±16.08)ng/ml則分別顯著低于對(duì)照組的TFPI濃度(5.13±0.93)ng/ml、TFPI-2濃度(23.65±6.57)ng/ml和t-PA濃度(67.12±18.91)ng/ml。兩組比較也均有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)論:重度子癇前期患者的病理性高凝血狀態(tài)和凝血/抗凝血、纖溶/抗纖溶因子的平衡失調(diào)有關(guān)，內(nèi)皮細(xì)胞的損傷或激活、胎盤表達(dá)凝血相關(guān)因子異?？赡苁侵匾?。 第二部分子癇前期患者胎盤凝血、纖溶

4、相關(guān)因子的表達(dá)研究 目的:觀察凝血、纖溶相關(guān)因子在子癇前期患者胎盤的表達(dá)情況。方法：采用免疫組化、Real Time PCR及Western Blot方法，對(duì)正常妊娠及重度子癇前期患者胎盤TF、TFPI、TFPI-2、t-PA及PAI-1的基因和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行研究。結(jié)果：①免疫組化結(jié)果顯示：子癇前期患者胎盤組織的滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)可見TF的陽性表達(dá)，而正常妊娠胎盤組織未見TF的陽性表達(dá)；TFPI、TFPI-2

5、及PAI-1在子癇前期及正常妊娠胎盤均有明顯表達(dá)，而t-PA在胎盤的表達(dá)則呈陰性。②子癇前期患者胎盤TF、PAI-1的mRNA及蛋向表達(dá)水平分別顯著高于正常妊娠婦女胎盤的TF和PAI-1 mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)水平；二組比較均有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)；而TFPI、TFPI-2在子癇前期胎盤的mRNA及蛋白表達(dá)水平則分別顯著低于正常妊娠胎盤的mRNA及蛋白表達(dá)水平(P<0.01)：t-PA的mRNA及蛋白表達(dá)水平在兩組之

6、間無顯著性差異。③相關(guān)性分析表明：子癇前期患者外周血TF、TFPI-2及t-PA濃度均與胎盤蛋白表達(dá)水平呈顯著性相關(guān)(P<0.01，P<0.05)，而在正常妊娠孕婦僅TFPI-2的外周血濃度與胎盤蛋白表達(dá)水平之間呈顯著相關(guān)(P<0.01)，其余則相關(guān)不顯著。結(jié)論: 子癇前期患者胎盤TF、PAI-1的表達(dá)顯著增加，而TFPI、TDPI-2的表達(dá)則顯著降低。胎盤表達(dá)凝血、纖溶因子異常是重度子癇前期患者高凝血狀態(tài)的重要原因。 第三部

7、分缺氧-再供氧及細(xì)胞因子對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞凝血相關(guān)因子表達(dá)的影響 目的:觀察缺氧-再供氧及炎性因子對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞凝血相關(guān)因子表達(dá)的影響，探討重度子癇前期患者胎盤表達(dá)凝血因子異常的發(fā)生機(jī)制。方法：將分離和原代培養(yǎng)的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞分成6組，在缺氧、缺氧再供氧條件下及IL-10、IL-12及TNF-α的作用下，采用Real TimePCR和ELLISA方法觀察各組滋養(yǎng)細(xì)胞凝血相關(guān)因子在基因和蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果：缺氧組及缺-復(fù)氧組TF、TFPI

8、及PAl-1的mRNA表達(dá)及上清濃度均明顯增高，與對(duì)照組比較均有顯著性差異(p<0.01)。而且TF及PAl-1在再復(fù)氧條件時(shí)比缺氧條件升高的更加顯著。TFPI-2 mRNA表達(dá)及上清濃度在缺氧組明顯高于對(duì)照組，但在缺．復(fù)氧組則顯著低于對(duì)照組(p<0.01)，t-PA在缺氧條件下mRNA表達(dá)及分泌量與對(duì)照組無差異，但在缺-復(fù)氧條件下分泌量卻明顯降低。TNF-α在20ng/ml濃度下，可明顯增加TF及PAI-1的基因表達(dá)和蛋白分泌量，TF