水稻抽穗期基因的克隆及HAF1互作蛋白的篩選.pdf

1、水稻(Oryza sativa)作為主要的糧食作物，養(yǎng)育了世界上近一半的人口。抽穗期在很大程度上決定著水稻的種植地區(qū)與生長季節(jié)，是影響水稻產(chǎn)量的關(guān)鍵指標(biāo)之一。本課題組利用EMS誘變水稻品種空育131獲得了一批抽穗期突變體。本研究擬采用MutMap方法定位水稻抽穗期基因，為完善水稻抽穗期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研究積累遺傳材料。此外，Heading date Associated Factor1(HAF1)為本課題組克隆的重要抽穗期基因，其編碼一個含有

2、C3HC4 Ring Finger結(jié)構(gòu)域的E3泛素連接酶。利用酵母雙雜交的方法篩選獲得一些HAF1的互作蛋白，將對闡明HAF1在水稻成花等調(diào)控路徑中的功能具有重要意義。本研究取得的主要結(jié)果如下:
　　1.從本實驗室已構(gòu)建的空育131甲基磺酸乙酯(EMS)突變體庫中鑒定了54份晚抽穗突變體，通過采用與空育131原種雜交的方法配置F2分離群體。目前已觀察到8個F2群體出現(xiàn)表型分離且分離比符合3∶1，說明這些家系的突變表型均為單個隱性核

3、基因調(diào)控。對這些F2群體的突變體DNA pool分別進行全基因組測序，測序數(shù)據(jù)采用MutMap方法分析，并對分析結(jié)果進行驗證。結(jié)果表明:B741、B12、A114和D599為Ehd1的不同等位突變體，它們在Ehd1基因不同位點存在堿基替換，導(dǎo)致其編碼的氨基酸序列發(fā)生改變;F345不抽穗的表型是由一個FAT結(jié)構(gòu)域蛋白基因突變所致，該基因第4989位堿基由C變?yōu)門，致使其編碼的蛋白質(zhì)第968位的亮氨酸替換成脯氨酸，并且表型和基因型完全共分離

4、;E597和I459兩個家系的突變基因均定位于水稻10號染色體上，并分別鑒定出幾個候選基因。
　　2.以HAF1(288a.a-667a.a)蛋白為bait，篩選擬南芥轉(zhuǎn)錄因子文庫。共篩選到13個與水稻HAF1蛋白互作的擬南芥轉(zhuǎn)錄因子，通過同源性比對，得到9個水稻中候選的HAF1互作蛋白CIFs。借助酵母雙雜交、pull-down、BiFC或BiLC的方法證明CIF1、CIF2能夠和HAF1互作。酵母截短實驗進一步證明CIF2與H