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文檔簡介
1、羽扇豆醇是一種植物天然提取物,近來被證明是一種有效的癌細胞生長抑制藥物。揭示其內(nèi)在的抗癌分子機制,將有助于解決目前主流抗癌藥物耐藥性的問題,推動新型組合藥物的研發(fā)進程。另一方面,在抗癌研究領(lǐng)域,miRNA是最近的研究熱點,其合成機制已基本明確,調(diào)節(jié)方式途徑也越發(fā)充實,許多miRNA的功能被相繼闡釋,基于序列分析的高通量靶標預(yù)測數(shù)據(jù)庫和二級結(jié)構(gòu)分析工具也日趨成熟。因此,本研究用 hela細胞建立了羽扇豆醇及對照藥物的多時間節(jié)點處理模型,以
2、 miRNA的表達量變化為切入點進行分析。
本研究首先以 U6為內(nèi)參,用核酸芯片的方法對藥物處理模型進行了全miRNA分析,通過對多藥物處理的核酸芯片分析結(jié)果進行比較,發(fā)現(xiàn)多種miRNA表達量變化極為相似,在對比點陣圖中有成簇分布現(xiàn)象,并且同簇miRNA的高頻共同靶標基因如ERBB4,TEAD和 MeCP2等與癌細胞調(diào)節(jié)密切相關(guān)。
稍后的研究中,對核酸芯片結(jié)果使用顯著差異和聚類分析法進行統(tǒng)計整理,結(jié)合現(xiàn)有研究進展,認
3、為 miR-504和 miR-34a的表達量變化可能與重要抗癌基因 P53有關(guān),因此使用熒光定量PCR技術(shù)對二者的多時間節(jié)點處理結(jié)果進行了檢測,檢測結(jié)果與核酸芯片結(jié)果一致,即 miR-504相對表達量顯著下調(diào), miR-34a在6h后至24h無顯著變化。
根據(jù) targetscan(http://www.targetscan.org/)靶標預(yù)測數(shù)據(jù)庫檢索和已有研究成果,P53是 miR-504的直接靶標基因,其3’UTR上有兩
4、個 miR-504 seed序列的直接結(jié)合位點,因此被 miR-504直接抑制,對照羽扇豆醇抗癌效果,認為miR-504-p53是羽扇豆醇的潛在抑制癌細胞生長途徑的一部分。另一方面,BCL-2、E2F3、E2F5、CDK4、CDK6、Cyclin E2、c-myc等被已有研究驗證是 miR-34a的靶標基因,這些蛋白基本都參與 p53的細胞凋亡或細胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò),與細胞的抗癌及癌變有密切關(guān)系,因此認為“miR-504-p53-miR-3
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